PDF《Hieff MutTM》

1 μl 扩增产物 40~50 μl 轻轻吹打混匀后,将上述反应体系置于 37℃恒温反应 1~2 小时.如产物扩增特异,产物条带单一,DpnI 消化产物无需纯 化,可直接用于后续重组反应.如扩增不特异,DpnI 消化结束后应胶回收纯化目标扩增产物. 4. 重组反应 4.1 配制重组反应体系 正反向扩增引物5'

端包含完全反向互补的一段序列,因此在Exnase催化下扩增产物5'

末端和3'

末端可以发生同源重组, 完成扩增产物环化过程.于冰水浴中,将下列组分依次加到无菌的1.5 ml Eppendorf管或PCR管的管底.如果不慎将液体粘在 管壁,请务必通过短暂离心使其沉入管底.体系配制完成后,用移液器上下轻轻吹打几次混匀各组分,避免产生气泡 (请勿 剧烈震荡或者涡旋混匀). 2* ........