PDF《南京军 区军事》

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7 第13卷第2 期1998年 6月|}]围病毒学VI ROl J OGI CA SI NI C A V0 I

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9 8 乙型 肝 炎病毒 a d r 亚型 x蛋 白在大肠杆菌 中的高效表达 房 蓐兴 周 宗安 V翟春 生顾忘香 王 元伦 何亮 ( 南京军区军事医学研窀所.

南京210002|『摘要将adr亚氆 HB V的完整 x基因 觅隆到 表达质粒 p P mE X HT B巾, 实现rx蛋白在大腑杆 菌中的高技融 合表 述 表达 产物 全K179个氡 基酸残基( 其中 x蛋白部分

1 5 4十最 基酸 戏基 ) , 分 子量约 I

9 7 k D . 约占细菌总蛋白的

3 4 %.奠氨基 端融合 部分 吉有 6组 氨酸胨 段经HisTr~, r M亲 和层折纯化 .一 班可 选纯度

9 3 % We s t e r n C l J 述分析 表明, 诚表述 产物 可与HB V感染 患者 体 内的 抗 x抗 体特 异性结 合 关键词 乙型肝炎病 每. x堆因. 融台 表达 . We s t e r n印迹 乙型 肝 炎病 毒(HB v) 基 圈组 含有 4个 已知 的开放阕读框架 ( OR F ) , 分别称为C、 S 、 P祁x. 其中 X O R F , 叉称 x基因,编码

1 5 4个 氯基 酸( 个别 毒株 缺失140―1

4 8位 氯基 酩)的蛋白.

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8 5年,Mo r i a r t y等首 次 报道 了 x蛋 白的基 因工 程表 达.l.蹦合 成的 x 蛋 白为抗 原 翩备 的抗 x抗体 ( 抗一}IBx),在HB V感染患者 肝 细胞 中检 测到 x抗原(X蛋 白) , 并在HB V 携带者中发现抗 一HBxE].随 着 基因工 程 x蛋 白的制 备 以及对该 蛋 白的深 入研 究,人们已经开 始 了解其 广泛 的 生物 学作用.最 引人 注 目的 是其反式活化转录因子作 用,它不仅能活化 HB V 自身 的启动子 , 而且 还可活化一 些 异源 性病毒[.1和细 胞…启动子尤其 是 x蛋 白在 激活细胞 基 因方 面的 作用已成 为 国内外 研究的热 点一本研 究将国内第 一个经过 垒基因组 核 苷酸 序列分析的adr亚型HB V

1 4 ] X 基 因克 隆于PmE X T M HT 原棱 表达系统 , 实现了在大 肠杆 菌中 的高效融合表达,表达产物 氨基 末端 含有

6 组氨酸肽 段,很容易经 Hi s Tr a p 亲和层析纯 他.为进 一步研 究x蛋白的 生物 学功能奠定 了基 础 材料与方 法I材料iI盾垃和 菌种 占adr亚型HB I . , 争基剐纽 的蘑组质杭 p AD R ― D N A 由中 科学院 上海 物化学 研究所 甘人宝先 生熹赠m一表达载 体P∞E X ― H

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[ b c o B R l 产品) 由率研究所李 越希 先生 惠赠 ;

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5 . 菌种 由奉 研究所保 . .

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2 工 具酶和 主要试剂 各种 限制性丰 妄酸内Ⅵ晦、T4I ) NA连接酶 、 T a q DN A聚合 酶、 异 丙基一 p .

1 ) _ 碾代乳糖苷 ( I P TG) 和三磷酸脱 氧丰 莲苷(dNTP) 购自Prome g a公司 : 抗HBx阳性 血清 和辣根 过 氧化 物酶 l HR P) 拆i羊抗 人IgG分 别南木研究 所保存和制 备;

s l I VE R S E Q UE NC E T D N A序列分析 系统购 自Prame g a公司 ;

H Tr a 亲和 层析纯化 系统屿 自PharTI_acia公司;

IWe m 印迹 椅涮试青 } ( Ame r s h a m产品)由本研 究 听朱敏 牧稿 日期 : f

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