PDF《南京军 区军事》

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1 二烷 基硫酸钠一 罪I可烯酰胺 凝胶} 乜冰( S D . %P A G E) 按方法 [ I

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2 6 丧达 蛋l 的纯化 先拨方法 [ I

5 ] 制 镯丧逃产物 也禽悼 将典 重溶

1 8t oo l / I _ 屉隶的磷 酸曼(Ptk~LI)中. H s T , Ⅲ 亲和 瞄析柱进 行纯 化, 疆得 瓠基 乖端含 有 6组 谴舷 腱段 的融 合自His~ag、x( 简挣 H X蛋白)

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亲和层析纯 化的 H X蛋白进行 S D $P A G E后,按方法 【

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1 转睁硝酸 r 坪维 索膜 l : . 经抗HB x 随 后帕 HR P 扎A G作刷 J 舌. 用ECIW( ~ s t u n l 箍:=寺lI也行戈光f2也确 定持件印 一结果jHB V x基 因的 克隆 与 限制 性 酶切 鉴定以HB V 基 因维 D NA 为模 板.PX1和PX2为引物 、 经PC.R扩增 获得预期一0476¨.(1)将其以K1enow大片段 处理后.与smI酶切的pUC I

8 D NA 相连接,获得r垣 绝・粒,其中包括 正 向和反 向插 入者 . 分 别经 Nc o I Xb a I 双酶 切和Xh a l 单酶切鉴定 正 向插 命名为口UC X, 反 向插 入者 命 名为 p U C Xr ,两者 均 可经 Nc o I , X b a I 双酶 t

7 】 获得x基 图片S

2 x基因的核苷酸序列分析 含 x基 因的 重组 噬菌体 p MI

3 X单链 D NA 为模 板,用pUC / MI 3通用;

物按试剂 盎说明书进 行核 苷酸序列 分析 结果表明x基 因序 列与 预期 的 袒一致 f 母2):3表达质粒pEXHX的 构建 以Nc . I Xb a l 双酶切口UC X D NA. 回收 X 基固(474bp),与NcolXbaI双酶切的i、Pr¨F*HTb D NA相连接, 获得 重 组表 达 质粒 p EX HX( 图3).4HX蛋 白的表 达 与纯 化将表达 质粒 Exj t X转化蔺过 戎培养后 . 按11(30稀释 予1B培 兼基.

3 7 ~ t : 摇撼蜂bu入IPTG至终 浓度为

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4 mn 、 u j / L , 续诱导培本3 h .离心收集荫体 经I)PA( ;

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4 中国病毒学第13卷 ^ c T c G e A

6 C ^ ^ T C T c A A C G ^ C C G A c c T t G A G

6 闭2克隆的x基 困部分棱苷醢序列Fi g

2 Pa r t i a l …i c l l d c e 罔IHH V x 基因的 P C R扩增 1标准DNA 片段 ;

2 . 显示扩增的X基目片段 (

4 7

6 h p ) Fi g

1 Am p l i f ic a t i ~ HB V X g e ne b y PCR I I: M A … k e r ;