PDF《天津和唐山小豆地方品种遗传多样性分析》

国家食用豆产业技术体系建设(CARS―09) 作者简介:刘振兴,副研究员,主要从事食用豆类资源研究与育种工作.E―mall:[email protected] 通讯作者:程须珍,研究员o E-mail:Chengxz@cⅢ.net.cn 万方数据

680 植物遗传资源学报 12卷 及其遗传育种具有重要的意义¨1.我国小豆遗传 多样性研究相对薄弱,分子标记常用AFLP、RAPD 等通用型标记,但是RAPD稳定性较差,AFLP耗 费高、操作复杂H],在遗传多样性分析中逐渐被 SSR标记所取代,尤其是近5年来SSR标记已广 泛应用于豆类作物遗传多样性的研究中¨母J.前 人对小豆遗传多样性的研究大多集中在个体,或 是先运用NTSYS软件,依据遗传相似系数进行聚 类分析,然后根据树型图分组讨论.由于在不同 的区域在生产实际中存在着相互引种的现象,根 据遗传相似系数划分出的组群,可能与实际有所 不同.本试验利用SSR分子标记技术,对不同来 源的红小豆地方品种群体遗传多样性水平和遗传 结构进行分析,旨在揭示唐山红小豆和天津红小 豆不同群体的差异及其相互关系,进而为该区域 红小豆种质资源的保存、评价及其杂交亲本的选 择提供理论依据. 1材料与方法 1.1试验材料 参试材料96份,其中包含唐山红小豆66份(玉田17份、遵化12份、乐亭13份、迁安8份、迁西6 份、滦县6份、滦南4份),天津红小豆30份(武清 13份、静海5份、宁河2份、宝坻3份、蓟县3份、大港1份、天津3份),唐山红小豆由河北省唐山市农 业科学研究院提供,天津红小豆由中国农业科学院 作物科学研究所提供.'

1.2试验方法 1.2.1 DNA的提取将每份种质材料5粒种子播 种于营养钵内,置20―25℃温室,出苗10d左右,从 每份材料的5株幼苗上采集第1个三出复叶刚展开 的嫩叶0.39左右,在液氮中研磨成细粉,用CTAB 表1具有多态性的89对引物 Table

1 Polymorphic SSR markers 法提取基因组DNA,放入一20℃冰箱备用. 1.2.2 SSR分析 SSR引物由中国农业科学院作 物科学研究所提供,SSR分析的PCR扩增反应在 Perkin―Elmer GeneAmp PCR System 960热循环仪上 进行,反应体系20I山l,包含lOng/Ixl DNA模板3斗l, 10*buffer 2¨l,25mmo/L MgCl2 1.2斗l,2.5mmol/l dNTPs 0.4斗l 21也mol/1正、反SSR引物各0.75斗l, 2.5U/斗I Tag DNA聚合酶0.241山1,ddH20 11.66斗l. 反应程序为95℃预变性5min;

95 C变性30s,退火 30s,72℃延伸30s,循环35次:72℃延伸5min.用6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物,参照梁宏 伟等¨叫的方法快速银染. 1.2.3 数据统计与分析在电泳图谱上,按照各 SSR位点PCR扩增片段读取数据,同时根据分析软 件的要求转换成相应的格式.利用PopGene 32软件 计算以下参数:多态带数(Number of polymorphie bands,NP);

等位基因平均数(Average numbers of al- leles,Na);

有效等位基因数(Effecttive number of al― leles,Ne);

信息指数(Shannon'

S information index,I). 2结果与分析 2.1 SSR标记的多态性 用197对小豆SSR引物对96份唐山、天津红小 豆进行扩增,共有89对引物(表1)扩增出285条清 晰、多态且能进行准确统计的条带,每对引物扩增的 等位基因数在2―6个不等,平均为3.21,其中引物 X

167、X187扩增出的等位变异数为6,多态性位点 的比率PPB达100%,多态信息量(P/C)在0.021― 0.726之间,其中引物X30的P/C值最小(0.021), 引物X39的P/C值(0.726)最大.多态信息量变幅 较大,说明96个小豆品种间存在着较丰富的遗传多 样性. 万方数据 5期 刘振兴等:天津和唐山小豆地方品种遗传多样性分析