PDF《• 药材与资源 •》

AsNINJA1 is extremely sensitive to MeJAtreatment, and responded to the early damage. Key words: Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg;

AsNINJA1 gene;

rapid amplification of cDNAends;

sequence analysis;

expression analysis;

MeJA 收稿日期:2014-06-11 基金项目:国家自然科学基金资助项目(81173481,31100220,31000136) ;

协和学者特聘教授 [医科人发(2012)282 号];

科技部国家创新人 才计划重点领域创新团队(2013) ;

中组部 万人计划 (2014) 作者简介:廖永翠(1985―) ,女,博士在读,研究方向为诱导型药用植物形成机理研究.Tel: (010)57833359 E-mail: [email protected] *通信作者 魏建和(1970―) ,男,研究员,博士生导师,主要从事药用植物基因资源和次生代谢调控研究. Tel: (010)57833358/57833016 E-mail: [email protected] 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第45 卷第20 期2014 年10 月・2969・ 白木香 Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg 又称土沉 香,属瑞香科沉香属植物,是我国生产名贵芳香类 药材沉香的唯一正品植物来源,现已被列为国家二 级濒危保护植物.沉香味辛、苦,性微温,具有行 气止痛、温中止呕、纳气平喘等功效[1] .白木香是 一种典型的伤害诱导型药用植物,只有在受到伤害 后才能在其伤口周围木质部产生倍半萜等沉香类物 质.研究表明,伤害诱导沉香形成是白木香防御反 应的产物[2] . 为研究伤害诱导沉香形成的分子机制,课题组 前期对健康和伤害处理的白木香进行了转录组分 析,并重点分析了参与倍半萜合成与调控的关键基 因;

发现外源茉莉酸(JA)处理显著诱导倍半萜合 酶基因的表达,经茉莉酸酯(MeJA)处理的愈伤组 织中倍半萜成分的含量相对于健康组织升高了

70 多倍[3] . 白木香悬浮细胞经 MeJA 处理后, 可增加

5 个δ-愈创木烯合酶基因的表达量,同时增加倍半萜 δ-愈创木烯的量[4] .此外,白木香树经机械伤害和 外施 MeJA 处理, 内源茉莉酸素 (JAs) 量显著增加, 同时产生

3 种倍半萜物质[5-6] .这些结果表明,JA 信号在白木香诱导结香中扮演重要角色. 大量的研究表明,JA 是伤信号转导途径中长 距离运输的重要信号分子,依赖于 JA 作为调节反 应信号的防御应答也是植物次生代谢物质积累的 前提[7-9] .NINJA(Novel Interactor of JAZ)是JA 信 号途径中的负调控因子;

在拟南芥中,Pauwels 等[10] 发现了互作蛋白(jasmonate Zim-domain,JAZ)抑 制蛋白与协同抑制因子 TOPLESS(TPL)和TPL 相 关蛋白(TPLs)的结合需要 NINJA 蛋白的参与,共 同调控着JA信号途径相关次生代谢物的合成并达到 植物防御的目的.本实验首次报道了白木香 NINJA (AsNINJA1) 基因 cDNA 全长的克隆及表达分析, 为 进一步研究 AsNINJA1 蛋白的功能及揭示 JA 信号在 白木香倍半萜形成中的作用机制奠定基础.

1 材料与方法 1.1 材料 中国医学科学院药用植物研究所温室栽培的

3 年生白木香茎诱导产生,生长良好且基本一致的白 木香愈伤组织,转接到含有

100 μmol/L 浓度 MeJA 的MS 固体培养基中,25 ℃暗培养,8 个不同时间 段(0.

5、

1、

2、

4、

6、

8、

16、24 h)取样,分别设 置3个生物学重复.以同一批生长一致的白木香愈 伤组织同时转接到不含 MeJA 的MS 培养基中

25 ℃暗培养,分别在相同时间段(0.

5、

1、

2、

4、

6、

8、

16、24 h)取样,均设

3 个重复,作为对照.所 有的材料取样后均置于液氮中速冻后,?80 ℃冰箱 保存备用. 1.2 试剂 植物总 RNA 提取试剂盒、Fast HiFidelity Polymerase 高保真酶、大肠杆菌 DH5α 感受态、多聚酶链反应(PCR ) 产物胶回收试剂盒、pZeroBack/blunt 零背景连接试剂盒购于天根生化科 技 (北京) 有限公司. pUC-T 载体 UltraSYBR Mixture 购于北京康为世纪生物科技有限公司.SMARTerTM RACE cDNAAmplification Kit 试剂盒购于日本宝生 物公司产品.RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit 购于 ThermoFisher........