PDF《urinary excretion study》

1331 ・ 活血通络粉针是由江苏康缘药业股份有限公司 研制的新型中药制剂, 该制剂将经典古方 桃红四 物汤 简化成由桃仁 (君药、主要有效成分: 苦杏仁 苷)、赤芍 (臣药、主要有效成分: 芍药苷)、川芎 (臣药、主要有效成分: 阿魏酸) 组成, 将原方功效 滋 养气血、 活血化瘀 化方为 活血化瘀、 行气通络 , 并制成静脉粉针与其汤药及 桃红四物注射液 进 行对比研究. 结果发现 活血通络粉针 比原方口服 给药疗效更高, 作用更快.且在降低脑水肿、抗血小 板聚集等方面不差于 桃红四物注射液 . 苦杏仁苷 (amygdalin, AD, 图1A) 和芍药苷 (paeoniflorin, PF, 图1B) 分别为活血通络粉针两种 源药材桃仁和赤芍的主要活性成分.对于两种化学 成分的定量分析多局限于生药及药物制剂的含量测 定[1?4] 、动物体内的含量测定[5?11] , 鲜见在人体尿液 样品中的两种成分的 LC-MS/MS 的定量分析方法的 报道. 在本研究中, 根据 FDA 和CFDA的指导原则[12,13] , 建立了同时测定人尿液中苦杏仁苷和芍药苷的 LC- MS/MS方法, 并将之应用于活血通络粉针剂的尿药排 泄研究, 旨在为活血通络粉针剂临床应用提供参考. Figure

1 Chemical structures of amygdalin (AD, A) and paeoniflorin (PF, B) 材料与方法 药品与试剂 苦杏仁苷对照品 (批号: 110820- 201004, 含量: 93.6%)、 芍药苷对照品 (批号: 110736- 201035, 含量: 96.5%) 和栀子苷对照品 (批号: 110749- 201115, 含量: 99.7%) 由中国食品药品检定研究院 提供;

活血通络粉针 (江苏康缘药业有限公司, 产品 批号: 120802, 规格:

6 g/瓶, 其中苦杏仁苷含量为 25.3 mg, 芍药苷含量为 35.8 mg). 仪器 API4000 质谱仪 (美国应用生物系统公司) 配有 Turbo-Ionspray 电喷雾离子源及 Analyst Software (1.5.2) 数据采集软件;

美国 Agilent

1260 高效液相色 谱系统 (G1312B 四元泵、 G4225A 真空脱气机、 G1367E 自动进样器、G1330B 柱温箱). 色谱条件 色谱柱: Hedera ODS-2 色谱柱 (2.1 mm*150 mm,

5 μm, 江苏汉邦科技有限公司);

预柱: C18 保护柱 (4.0 mm*2.0 mm,

5 μm, 美国 Phenomenex 公司);

流动相: 乙腈?5 mmol・L?1 醋酸铵水溶液 (含0.05%甲酸) (20∶80);

流速: 0.3 mL・min?1 ;

柱温: 38℃;

进样量:

10 μL. 质谱条件 离子检测方式为多反应监测 (MRM);

离子化方式为气动辅助电喷雾离子化 (ESI);

碰撞气 (CAD):

6 psi (1 psi ≈6.9 kPa);

气帘气 (CUR):

30 psi;

雾化气 (GS1):

70 psi;

辅助加热气 (GS2):

70 psi;

辅助加热温度为

400 ℃;

用于定量分析监测离子对: 苦杏仁苷 [M+NH4]+ m/z 475.2 →163.1;

芍药苷 [M+ NH4]+ m/z 498.2 →179.1;

内标 (栀子苷) [M+NH4]+ m/z 406.1 →227.1. 对照品溶液的配制 分别精密称取苦杏仁苷、 芍 药苷、 内标 (栀子苷) 适量, 置于

10 mL 量瓶中, 加甲 醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得浓度为

1 mg・mL?1 的各储备液.所有储备液置于

4 ℃保存待用. 尿液样品的预处理 于1.5 mL 离心管中, 加入尿 液样品100 μL, 精密加入栀子苷内标溶液 (10 μg・mL?1 )

20 μL, 涡旋混匀, 加入甲醇

900 μL 沉淀, 涡旋

3 min, 于15600 r・min?1 高速离心

10 min, 吸取上清液

100 μL 转移至另一 1.5 mL 离心管中, 精密加入流动相

900 μL 稀释, 涡旋混匀, 转移至自动进样器样品瓶中, 进样 量10 μL, 进行 LC-MS/MS 分析. 方法学考察 选择性 分别取来自