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而在暗视野情况下,其分 辨率可为 0.02~0.004μm. 因此, 暗视野观察又称 超显微术 . 缺点:只能观察到物体的存在和运动,而很难分辨其内部 结构. 应用: (1)观察如硅藻、放射虫类、细菌等具有规律结构的 单细胞生物和细胞的外部细微结构,如鞭毛、纤维等. (2)观察细胞内微小颗粒的运动.

三、相差(Phase Contrast) 在光学显微镜的改进过程中, 相差显微镜的制造成功和普遍应用, 是近代显微镜 技术中的重要成就.在1935 年荷兰学者泽尼克提出了相差法原理,至1941 年由德 国蔡司工厂诞生了世界上第一台相差显微镜.它的产生,使人类的视觉在光学显微 镜下又得到新的扩展.从信息利用的角度来看,人们将它视为光学信息处理概念下 的第一个产品,因而获得了

1953 年诺贝尔奖金. 原理:相差显微镜利用被检物体的光程(折射率与厚度之乘积)之差进行镜检. 即有效地利用光的干涉现象,将人眼不可分辨的 相位差变为可分辨的振幅差.即使是无色透明的 物质亦成为清晰可见,这是普通显微镜难以达到 的. 相差显微镜在装置上都包括: 相位板和环 状光阑. 优点:活细胞不必染色就能看到,可清楚地分辨细胞的 形态,以及细胞核等颗粒状结构. 相位板环状光阑明视野和相差的对比图 www.microimage.com.cn

2008 年7月31 日 第三期 Page

5 缺点: (1)光晕和渐暗光晕妨碍了精细结构的观察. (2)样品的厚度应该为 5μm 或者更薄.当样品较厚时,上层是很清楚,深层则会模糊不清,并且会产生相位移 干扰及光的散射干扰. (3)只有明暗对比,没有三维立体感.

四、微分干涉相衬(DIC,Differential and Interference Contrast) 微分干涉相衬显微镜是在

60 年代中期出现的, 它不仅能观 察无色透明的物体,而且图像呈现出浮雕状的立体感,具有相 差显微术所不能达到的某些优点,观察效果更为逼真,它在多 学科的研究应用中日益显示出其优越性能. 原理:微分干涉相衬显微镜利用了偏光干涉的原理:光只 有在振源频率相同,各波列之间有固定的相位差并且振动方向 一致时才会发生干涉.因此干涉显微镜都具备偏光装置(起偏 镜和检偏镜) , 起偏镜是用来产生偏光的, 检偏镜是检查偏光的. 产生偏光后,微分干涉相衬显微镜利用特制的渥拉斯顿棱 镜(或诺马斯基棱镜)来分解光束.分裂出来的两个光束的振动方向相互垂直且强 度相等,光束分别在距离很近的两点(小于光学分辨率)上通过被检物体,在相位 上略有差别.由于两光束的裂距极小,而不出现重影现象,使图像呈现出立体的三 维感觉. 优点: (1)产生浮雕状三维立体感,不出现光晕现象;

(2)能观察无色透明的 物体;

(3)无需特殊物镜;

(4)比相差观察的分辨率更高. 缺点:需要光强高,双折射性的物质不能达到 DIC 效果, 不能用于塑料容器观察. 应用:常用于观察无色透明活体标本的细微结构和显微操 作(细胞注射) .

五、塑料微分干涉相衬(PlasDIC) 塑料微分干涉相衬是 ZEISS 公司的专利技术,曾获 R&

D100 奖.这是第一个适 用于实验室常规应用的微分干涉相衬技术,并可以应用于观察塑料容器,对薄或厚 样品都可以产生出色的浮雕三维效果,得到更重要的细节特征. 其原理与微分干涉相衬相似,在部件上多一个狭缝光阑,少一块诺马斯基棱镜. 优点: (1)操作方便,无需调中和变换光阑. (2)图像效果好. (3)使用标准 微分干涉与相差比较图www.microimage.com.cn