PDF《产品手册》

1 | P a g e 产品手册 MirAd TM MicroRNA 前体腺病毒表达系统 本产品仅限用于研究,严禁用于任何动物或人类疾病诊断.

本产品仅供购买方内部研究使用,未经 ViGene 生物科技有限公司书面许 可,严禁转售.

2 | P a g e 目录 产品简介

4 产品组成

5 保存条件

5 使用安全注意事项

6 pMirAd 载体图谱

6 质粒扩增

6 病毒载体扩增

7 常见问题解答

8 3 | P a g e 产品有限责任担保 Vigene生物保证您收到的产品符合产品目录上的规格.本担保规定了Vigene 更换产品的责任.Vigene生物不提供其他任何形式的对于产品商业或健康用 途的保证.Vigene生物不对任何由于使用或不正确使用本公司产品造成的直 接、间接的、衍生的或偶然的损害所产生的后果负责. 产品订购和技术支持 山东维真生物科技有限公司 暨美国 ViGene Biosciences 公司中国办 事处 美国地址:12111 Parklawn Dr. Rockville, MD

20852 US 北京办事处:北京市海淀区北三环西路

43 号青云里满庭芳园 D 座1206 室 上海办事处:上海市徐汇区肇家浜路

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2350 号留学人员创业园

717 室Email: [email protected] Phone: 400-077-2566 www.vigenebio.com(美国) www.vigenebio.cn(中国) 欢迎您致电或发邮件,咨询产品技术信息.

4 | P a g e 产品简介 MicroRNAs(miRNAs)是一类长度为18-24个核苷酸的非编码RNA分子. MiRNA通过与靶基因mRNA上的互补序列结合,降解mRNA或抑制mRNA的 翻译.MiRNAs在细胞分化、增殖、凋亡和癌细胞发生中发挥重要的调控作 用.MiRNAs 来源于具有60-80 个核苷酸茎环结构的microRNA 前体(premir)和序列更长一些的microRNA初级转录产物(primir).MiRNA在 核内由RNA聚合酶II(polII)转录生成,最初产物primir具有帽子结构和多聚 腺苷酸尾巴. ViGene生物的mirAD-腺病毒microRNA前体表达系统包括三个相关产品: microRNA前体穿梭载体、microRNA前体腺病毒载体和预制microRNA前 体腺病毒. 重组腺病毒是进行基因转移和表达的工具,功能强大且易于操作.腺病毒独 特的生物学特征使它成为 载体的首选 ,被科研工作者广泛应用.首先, 它能够感染包括分裂、非分裂细胞和干细胞在内的多种细胞.第二,病毒滴 度高.第三,高滴度的病毒可获得高感染效率和高表达量.第四,病毒进入 细胞后,病毒基因组不整合到细胞染色体上,因此瞬时表达外源基因的重组 腺病毒不会诱导宿主细胞中染色体的变化.ViGene生物选用的是应用最广 泛的复制缺陷型的人类血清5型腺病毒,该腺病毒载体缺失E1和E3基因.E1 基因在组装感染性病毒颗粒时必不可少,可在HEK293T细胞病毒包装过程中 得到补充,而E3基因可有可无.由于E1和E3基因的缺失,腺病毒载体可插 入高达7.5kb的外源基因. pMir-microRNA precursor 是基于microRNA 前体表达系统的质粒.microRNA前体天然的茎环结构被克隆到质粒的SgfI和MluI双酶切位点.为了 保持推测的发卡结构和诱导正确的内源性反应,miRNA茎环结构的两侧具有 它的150-200bp的天然序列.MicroRNA前体在CMV启动子启动下表达,其 上游有GFP荧光标记,并具有SV40 poly(A)加尾信号.穿梭载体含有 SV40启动子启动的puromycin嘌呤霉素标记,可以用来进行稳转细胞株的筛 选.穿梭载体还含有两个腺病毒ITR序列和两个与腺病毒Ad5同源的序列,可5|Page用于将microRNA前体同源重组到腺病毒载体. microRNA前体腺病毒载体 通过在大肠杆菌中同源重组,将microRNA序列 从pEnter和除慢病毒、腺相关病毒之外的大部分的目的载体转移至pAD腺病 毒载体.pAD是最常用的人类腺病毒载体,是人类腺病毒血清5型,E1和E3 基因的缺失. pAD-ORF质粒可用于在HEK293细胞中包装重组腺病毒. microRNA前体腺病毒是microRNA前体的重组腺病毒表达系统.ViGene的预制microRNA 腺病毒能够有效地传递microRNA 前体,可应用于microRNA 体外和体内的功能研究. 产品组成 产品主要包括以下部分: 1. pMir-microRNA 前体甘油菌液. 100ul. 2. pAD-microRNA 前体甘油菌液. 100ul. 3. MirAd-microRNA 前体腺病毒. 每100ul 含有