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1 Calbiochem? FragEL? DNA Fragmentation Detection Kit, Colorimetric -TdT Enzyme 目录货号 目录货号 目录货号 目录货号 QIA33 背景介绍 背景介绍 背景介绍 背景介绍: : : : 细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象,在生物体进化、内环境的稳定以及系统发育中发挥着 重要的作用.细胞凋亡发生在正常的细胞周期循环中,并发生形态学和生理生化的特征性改变,比 如细胞皱缩,细胞间连接消失,线粒体膜电位消失,通透性改变,核质浓缩,核膜核仁破碎,DNA 降解成为约 180bp-200bp 的片段;

胞膜有小泡状突起,膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面,胞膜结 构仍保持完整,最终凋亡细胞遗骸被分割包裹为几个凋亡小体,并迅速被周围专职或非专职吞噬细 胞吞噬.以上改变发生在不同的细胞凋亡阶段. 检测原理 检测原理 检测原理 检测原理: : : : 在凋亡晚期细胞中,DNA 会被降解为不同大小的片段,正常的或正在增殖的细胞则几乎没有 DNA 的断裂, 该方法是将生物素 (Biotin) 标记和未标记的 dNTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶 (TdT 酶)的作用下,连接到凋亡细胞中断裂 DNA 片段的 3'

-OH 末端,然后再用亲和素(Streptavidin)标 记的 HRP 与标记上的 Biotin-dNTP 结合,并通过 DAB 显色后用显微镜检测凋亡细胞.试剂盒对标 试剂盒对标 试剂盒对标 试剂盒对标 记反应进行了优化 记反应进行了优化 记反应进行了优化 记反应进行了优化, , , ,采用最佳比例的 采用最佳比例的 采用最佳比例的 采用最佳比例的生物 生物 生物 生物素标记和未标记的 素标记和未标记的 素标记和未标记的 素标记和未标记的 dNTP 进行 进行 进行 进行 3'

-OH 末端的核苷酸掺入 末端的核苷酸掺入 末端的核苷酸掺入 末端的核苷酸掺入, , , , 使得同一个断裂的 使得同一个断裂的 使得同一个断裂的 使得同一个断裂的 DNA 片段 片段 片段 片段末端可以形成更长的 末端可以形成更长的 末端可以形成更长的 末端可以形成更长的 标记尾巴 标记尾巴 标记尾巴 标记尾巴 , , , ,该该该该 标记尾巴 标记尾巴 标记尾巴 标记尾巴 减少了相邻掺入 减少了相邻掺入 减少了相邻掺入 减少了相邻掺入 dNTP 上标记基团的空间位阻 上标记基团的空间位阻 上标记基团的空间位阻 上标记基团的空间位阻, , , ,增加每个断裂片段后的 增加每个断裂片段后的 增加每个断裂片段后的 增加每个断裂片段后的标记 标记 标记 标记基团数目 基团数目 基团数目 基团数目;

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同时生物素和亲和素的高亲 同时生物素和亲和素的高亲 同时生物素和亲和素的高亲 同时生物素和亲和素的高亲 和力也可以 和力也可以 和力也可以 和力也可以提高检测灵敏度 提高检测灵敏度 提高检测灵敏度 提高检测灵敏度, , , ,减少非特异性反应 减少非特异性反应 减少非特异性反应 减少非特异性反应. . . .此外试剂盒中附有复染用甲基绿便于从形态学上 分辨评估正常细胞和凋亡细胞. 检测次数 检测次数 检测次数 检测次数: : : :50 次 检测方法 检测方法 检测方法 检测方法: : : :光学显微镜 样本类型 样本类型 样本类型 样本类型: : : :石蜡包埋组织切片、组织冰冻切片、固定细胞片 种属反应 种属反应 种属反应 种属反应: : : :一一一一系列不同种属 储存与运输条件 储存与运输条件 储存与运输条件 储存与运输条件: : : :试剂盒需用干冰运输并储存在-20℃非无霜冰箱中.第一次融化后,终止缓冲液 和复染用甲基绿需放于室温储存,封闭缓冲液需放于 4°C 储存.然而,再次冷冻后并不明显影响这 些缓冲液的使用效果. 默克生命科学服务热线 默克生命科学服务热线 默克生命科学服务热线 默克生命科学服务热线: : : :400-820-8872 邮箱 邮箱 邮箱