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产品中文说明书 OriCell 拟胚体(EB)形成培养基 产品货号:MUXES-90051 CBPI0149A8 MUXES-90051 Page

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4 产品描述 胚胎干细胞(ESCs)是来源于囊胚内细胞团的全能干细胞.

具有向外胚层、内 胚层、中胚层分化的能力,可以分化成各种类型细胞.不同于其他干细胞,胚胎干细 胞具有无限增殖能力.胚胎干细胞的可塑性和无限增殖的能力,使其成为再生医学和 组织工程研究的热点. 拟胚体(EBs)的形成是胚胎干细胞分化的主要步骤.在缺少小鼠胚胎成纤维细 胞(MEF)饲养层的情况下,胚胎干细胞经EB形成培养基的刺激会自发分化形成三 维聚集体,这种结构有利于细胞的相互作用,比如细胞间的接触和间隙连接的建立. OriCell 拟胚体(EB)形成培养基可增强小鼠胚胎干细胞(ESCs)分化形成EBs 的能力.本产品可采用悬滴形式或者在非吸附 Petri 培养皿中悬浮培养形成EBs. 本产品仅用于科研用途,不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途. 试剂盒成分 Embryoid Body Formation Basal Medium 拟胚体形成基础培养基

435 mL Embryoid Body Formation Basal Medium 拟胚体形成专用胎牛血清

50 mL Penincillin-Streptomycin 青霉素链霉素(双抗)

5 mL Glutamine 谷氨酰胺

5 mL Nonessential Amino Acid 非必需氨基酸

5 mL 2-Mercaptoethanol 2-巯基乙醇

500 ?L 使用说明 完全培养基的配制 1. 使用前,请将血清置于2~8℃环境中过夜解冻直至完全溶解,轻晃试剂瓶以确保 CBPI0149A8 MUXES-90051 Page

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4 血清混合均匀.本公司血清经热灭活处理,解冻后即可使用. 注意:解冻后的血清中可能会含有少量絮状沉淀,这些物质对产品质量无影响.不建议 采取过滤的方法去除沉淀物,此操作会导致血清中部分营养物质的流失. 2. 配制前30 min左右,室温下溶解双抗、谷氨酰胺和非必需氨基酸,轻轻的上下颠 倒试剂管以确保试剂混合均匀. 3. 配制前10 min左右,室温溶解2-巯基乙醇. 注意:在打开盖子前先短暂离心(2400*g) ,以确保试剂能被全部收集. 4. 用70%乙醇擦拭试剂盒中各瓶/管的开口外壁,室温放置数秒使酒精挥发. 5. 在超净台中无菌的打开以上各瓶/管. 6. 将拟胚体形成专用胎牛血清、双抗、谷氨酰胺和非必需氨基酸全部加入拟胚体形 成基础培养基中. 7. 无菌吸取少量基础培养基洗涤各瓶/管,尽可能的将所有组分完整的加入基础培养 基中. 8. 将2-巯基乙醇全部加入基础培养基中,吸取0.5 mL基础培养基洗涤各管,将混合 物全部转移到基础培养基中. 9. 重复步骤

8 数次. 10. 轻晃配制好的完全培养基,确保混合均匀之后即可使用. 注意:本公司完全培养基试剂盒中的每个成分均为无菌分装,但为确保完全无菌,也 可将混合后的完全培养基进行再次过滤除菌(0.22 μm 滤膜) . 拟胚体(EB)形成培养基使用规程 1. 准备明胶包被的100 mm细胞培养皿. 2. 加适量0.1%明胶到培养皿中,能覆盖整个培养瓶/皿底面的量即可. 3. 摇匀液体使其覆盖整个培养皿的底面. 4. 将铺有0.1%明胶的培养皿放置在超净台至少30min. 5.

30 min后,弃去明胶,待培养皿晾干后,即可用于接种细胞. CBPI0149A8 MUXES-90051 Page

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4 注意: 包被明胶的培养皿在无菌和明胶不蒸干的条件下,可以在4℃保存两周. 6. 准备一个T75培养瓶的胚胎干细胞(约1*107 cells).当细胞生长至对数期时可进 行拟胚体制备. 7. 消化细胞.注意:需将细胞消化为单个,确保其均一性.加入拟胚体形成培养基 终止消化. 8. 收集细胞,将细胞悬液转入15 mL离心管,250 g离心5 min. 9. 小心弃去上清. 10. 加入拟胚体形成培养基进行重悬,接种约5*106 个细胞至明胶包被的培养皿中, 加入约8 mL拟胚体形成培养基. 11. 放入37℃、5%CO