PDF《中的应用》

20 P-Stx2 ATACAATGACCAGAGATGCAT

20 ipaH Shigella spp F TAGAAGGCAGAGATGGAAGAGTT 401%0.6 R TACTGAGGCGGTAAGAAGACT 0.6 P CTCTGCGCTTAGTGATTTGATGGT

20 Listeria monocytogenes F CAAGCATGGACAAATGCACCAGTAAA 109%0.6 inlA R CGCCATCGCTAATAGTAGCTGGTG 0.6 P AATGTGACTGGCGCTTTAATTGC

20 Bacillus cereus F CCTTCATACGTATGGATGTT 368%0.6 gyrB R ATTGGTGACACCGATCAA 0.6 P TGCTAGCGTATCAAAATCGTATACTGTTGTTTC

20 Yersinia enterocolitica F GGTCATGGTGATGTTGATTACTAT

273 0.4 ail R TCGATACCCTGCACCAAGCA 0.4 P CCATCTTTCCGCATCAACGAATATG

20 Vibrio cholerae F GCCACAGCAACAACGCAAC 344%0.44 tcpI R AGAGAACGAACTTCATCCGCTAC 0.44 P AGAGCTTAATGCGGAGACGGCCCAAAAAT

15 Vibrio parahaemolyticus F AAAGCGGATTATGCAGAAGCACTG 450%0.48 tlh R GCTACTTTCTAGCATTTTCTCTGC 0.48 P CGCTCTGAGTGTGCAGCGTCTGGTGCT

20 PCR%Positive%Control F AAAACTCAAATGAATTGACGG%490%0.3 16S%rRNA R GTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGT 0.3 P GTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATG

10 表1%%检测

9 种食源致病菌的引物和探针序列 Tab.1 Sequences of primers and probes for detection of

9 foodborne pathogenic bacteria O157:H7 F:%Forward%primer;

%R:%Reverse%primer;

%P:%Probe% putative% membrane% protein PCR产物 (使变性的 DNA 分子保持在单链状态),贴 上透明胶膜后置于微孔板芯片快速杂交仪内,45%℃ 振动杂交反应 1%h. 杂交完成后,将96 微孔芯片盘置 于芯片全自动清洗遮蔽呈色仪上选择适宜的程序进 行洗板和呈色.主要步骤是将杂交液吸弃后用 200%μl 洗涤液(2*SSPC-1%SDS)清洗 3~4 次,接着往每个微 孔内加入 200%μl 已稀释

1000 倍的 Streptavidin-%AP 处理 20%min, 然后再用洗涤液清洗 3~4 次后再加入 稀释

50 倍的底物 NBT/BCIP 避光显色 10%min, 阳性 结果为蓝紫色斑点;

显色完成吸弃显色液,并用超纯 水洗

2 次,置室温干燥.然后........