PDF《键词 鎏堂 些中 和试验》

7

7 ―8 第1

2 卷第1 期1997年 3月中国病毒学VI R0L oGI CA S I NI CA 王o)^31Vo I _

1 2 No

1 Mar

1 9

97 草鱼出血病病毒抗原亚单位的研制 方勤江红柯丽华 ( 中国科学院武挝病毒研究所.

武覆4

3 0

0 7

1 ) ;

?

2 弓提要通过比较溶液 的离子 浓度 对 病毒形 态 结构 的 影响 , 发现 G CH V 在低 盐溶 液低 温 (一2

0 ℃ ) 保 存条 件下. 外壳 蛋白会 自动降解, 但不十分完全 .采 用舍

1 %N P

4 0 ( N o n i d e t p

4 0 ) 的稀盐溶液 处理 感染病毒的 细胞 , 经冻融及 差异离 心. 电镜下观察 到纯度较 高的病毒 双层衷 壳、核心衷壳及散 在 的子粒 .纯化的病 毒亚单 位用核 酸酶消化 后.与等 量的福 氏佐 剂混合 , 免疫 家兔制 备抗 体 .该 抗 血清 经 中和试验 测定, 显示 了较强 的中和病 毒的 能力.纯化 的病 毒亚单 位在7%聚丙烯 酰胺凝 胶 电泳条件下 . 未 见病 毒 电泳条带. 同时 采用地高 辛标 记的 G C HV c D N A克 隆探 针, 与 病毒 R N A 及亚 单位样 品进行斑 点杂 交, 检 测病 毒RNA灵 敏度 达到 l

0 p g , 病 毒亚 单位样品均 为 阴性 结果. 该亚 单位制 剂具有纯 度高体积小 的特 点. 将是 一种安全 性能 好、 使 用方 法简便 、 又便于保 存和运 输 的亚单位疫苗 .1 , 关键词鎏堂些中 和试验'

分子杂交毛扦f,坜疆、l一/, 草鱼出血病病毒( G aⅣ ) 是引起草鱼死亡的主要病原….十多年来. 我们对该病毒的形 态结构 、 生物 学 特性 及某些分子 生物 学性质等进行了研究],为揭示该病毒的致病 机理及发展抗病毒制剂创造 了条件. 七五 期间. 国内对草鱼出血病防治技术 的研究进展很大, 随着 组织浆及细胞灭活疫苗的相继应用 ・ . 出血病在一定程度 上得到了控 制.然而 由于疫苗 的 稳定性及可能存在的残余感染性 等因素. 出血病在不同地区仍时有发生 .由此看来. 研制一种 安全 高效的疫苗是防止出血病及发展鱼用病毒疫苗 的必然趋 势.国外对鱼用病毒疫苗的研 究起步 较早,特别 是近 期关于水生动物 病 毒基 因工 程疫苗的研 究报 道【9-】,拓宽了鱼用疫苗的研 究领域 .一般说来, 鱼用疫苗的纯度和安全性指标不及人用疫苗. 但要使疫苗达到有效地 防治 出血病 的 目的 , 杜绝出血病 的 再度 流行 , 就必须使 疫苗 生 产走 向正 规 及商 业化 的轨 道.为寻找防治 出血 病 的优选 途径. 八五期间.我们结 合 鱼用 疫苗及本国国情 , 试 图在 细胞疫苗基础上通过理化方法制备病毒抗原亚单位 . 为鱼用亚 单位疫苗研制探 索新路. 下 面报告 G C H V 抗原 亚 单位 研制的结果 . 材料 和方 法l细胞 培养和病毒 增殖 实验所用的 细胞 为鱼 肾CIK细胞系 . 病 毒毒株选 用GCHV ~ , 方 法按文献… 进行

2 病 毒纯化 殛亚单 位分 离病毒纯 化方法参 照文献 …, 其 病毒亚 单位 分离方 法如 下:待感染病 毒 的细胞出 现80%C P '

E时. 倒掉病毒维持 渡, 用10r et oo l / ! P B S清洗三次 . 收集病变细 胞 加入少量 的I%N P

4 0 ( 溶于

1 O : ~ x ;

mo l / LP B S ) . 置一∞ ℃ 冰箱. 经三 攻冻融 后.样品置离 心机

1 0

0 0

0 g低速 离心30r ai n . 除 去细胞 碎片. 然后, ・ 啦稿 H期:l996―0

5 ―1

7 修回 日期

1 9

9 6 ―0

9 一q

1 2 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国病毒学第12卷