PDF《仔猪副轮状病毒 （C群 ）的 检出》

5 m1 / 甘油2.5ml / 溴酚蓝10rag)溶解 ,4 ℃ 存放以备电泳2.聚丙烯酰胺凝胶电泳 : 采用垂直板式电泳 槽,不连续电泳 , 凝砍板规格20X1 4X0 .

1 c m. 浓缩胶为3嘶聚丙烯酰胺,缓冲液为pH6 . 8Tr i s ― HC

1 ,分离胶为5嘶聚丙烯酰胺 ,缓冲液为pH8 .

9 Tr i s ― HC I j 电泳 液为pH8 . s

0 .

1 2

5 mo

1 / L Tr l s 一0.192mo l / L甘氨酸;

恒电流

3 0 mA, 电泳

3 - - 4小时左右.3.染色:凝胶板用蒸馏 水漂洗,置0.

1 l mo l / L硝酸银溶 液中染色30分钟,在 蒸馏水中漂洗3冼 后,置0.75mo l / L Na

0 H一0.1mo l / L甲醛 液 中显 色至条带 清晰,以蒸馏水漂洗,置5 牾醋 酸液中固定 . 观察拍黑 后制 干保 存.

三、寓毒抗曩垂盘:1.典型轮状病毒(A 群 )群 抗原检测:用兰州生物 制品研究所生产的轮状病毒ELI S A试剂盒,按说明操作.2.副轮状病毒(B群 )群 抗原检测: 用本室分 离鉴定的羊副轮状病毒(B群 )病 科,以差 速离心和蔗糖垫层提取抗原,免 疫羔羊制备高免血清.被捡粪样以pH7 .

2 0 .

0 1 t oo l / L P B S 稀释后加等量 氯仿竞分撮 摇12000r/m离心s分 钟 ,碾 取上层液为 特 捡抗 原.同时设阳性抗原对照和阴性 血清对照,按Mi dd e t o n (

1 7 ) 和施惠达f . l 等对流免 疫 电泳 .但缓冲液 改用

0 .

0 3 mo l / L p H8 .

6 巴比 妥缓冲液

四、来 吮韧 乳仔 猪 的实 验感染:选 健康 临产母猪,守护特 产,产前阴部消毒,取 刚产仔猪4只,用灭菌敷料试 干后,置消毒箱 中隔离饲喂消毒牛乳.取PAGE 副轮 状癀毒(c群)电诛强阳性 ,典型轮状病毒 ( A 群)ELI S A 阴性 , 副轮 状病毒对流免 疫 电泳 阴性 的pll粪 样,以Ha n k '

s液l:10稀 释,3000r/m离 心30分钟,吸取.h清 液 ,加 入青霉素、链霉 素 、卡 那 霉素 (2

0 0 0单位.毫克/m1) 处理,作为 鎏种毒源.仔猪中2只接 毒,每只口服

2 ml , 2只对 照严格隔离饲艰运时观察记录结果,采集粪 样进行PAGE检删.

五、电蕾 檀童:取PI I 粪样,以PB S作l:

5 稀释,加入等量氯 仿充分振摇后,8

0 0

0 r / m 离心5分钟,吸取 上清,常规 制样、磷 钨酸负染电镜检查.

六、 考毒株:轮状病毒NCD V 袜 (江 苏农科院赠)、猴轮状病毒SA-

1 1 侏 (洪涛 教授赠)羊 副轮状病毒(B 群)(本 室分离). 结果

一、聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 用P A G E 法对一连猪场2

0 份腹泻标本进行检蹴 , 检出具有副轮状 病毒(c群)电泳图垄 的标本 I I份(P I I 、p l

3 、 P

1 4 、 p

1 5 p

1 6 , p

1 7 p

2 5 、 p

2 6 、 p

2 7 、 p

2 8 、 p

2 9),捡 出具有 副轮状 病毒 ( B 群)电泳图型的标 本 1份 ( p

2 2 ) ,来测 出 A群 轮 维普资讯 http://www.cqvip.com 赢毒学杂志

4 ,1

0 8

9 Vi r. l .gi c Si Ⅱi c ^

4 s

5 状病毒电泳型或混台电泳型的标 本.

二、病 毒 抗原 检 测结果 典型 轮状 病毒 ( A群) E L S A,

2 0份粪 样标本 除P一20阳性 外,其余 l

9 份 均为 阴性,副轮 状病毒 (B 群 )对流免 疫 电泳 检查 ,除P一22(P AG E亦为B群 阳性 )为 阳性外 ,其余 l

9 份均 为阴 性. - 三 、未吮 初乳仔猪 感染实 验对照组 仔猪 两只 单独 隔离 饲慢 , 观察

0 日未见腹 泻发 生,取12.1

3 、 、2

4 、4 8小 时肛拭 标本 ,作PAGE检查 ,均为 阴性, 实验组仔猪 两_兄,在接毒 后分 别于l

2 和l3小时,开 始 出现腹痛 症状并 排 出黄 色稀便 ,随后 排 出大 量水 样黄色粪 液 .在接毒 l