PDF《红树莓提取物降低油酸诱导 HepG2 细胞脂肪的积累》

二氧化碳培养 箱:美国赛默飞世尔科技公司;

超清工作台: YATAIKELONG;

离心机:湖南星科科学仪器有限公 司;

手提式压力蒸汽灭菌锅:上海博迅实业有限公司 医疗设备厂;

-80 ℃低温冰箱:美国赛默飞世尔科技 公司;

722 型可见分光光度计:上海光谱仪器有限公 司;

DHG-9240 型电热恒温鼓风干燥箱:上海一恒科 技有限公司;

25 cm2 透气细胞培养瓶:美国 Corning 公司;

96、12 孔板:美国 Corning 公司. 1.3 试验方法 1.3.1 红树莓提取物的制备 红树莓果提取物的制备[7] ,并略有修改:红树莓 冻果于室温解冻,解冻后研磨成红树莓果泥,以1:8 (g/mL)的料液比加入 65%乙醇,在提取温度

45 ℃、 提取时间

4 h 条件下密封震荡提取,3000 r/min 离心

15 min 取上清液, 提取两次合并两次上清液, 在45 ℃, 0.1 MPa 条件下真空旋转浓缩, 将浓缩液在-20 ℃预冻

24 h,-80 ℃预冻

2 h,冷冻干燥,得到红树莓果提取 物备用. 红树莓籽提取物的制备:红树莓籽粉碎后在

4 ℃ 用石油醚浸提脱脂,晾干称重以 1:60(g/mL)的料液 比加入 60%乙醇,并用超声波辅助在温度

40 ℃、功率350 W、时间

45 min 条件下密封提取,3000 r/min 离心

15 min 留上清液,提取两次合并两次上清液,在45 ℃,0.1 MPa 条件下真空旋转浓缩,将浓缩液在 -20 ℃预冻

24 h,-80 ℃预冻

2 h,冷冻干燥,得到红 树莓籽提取物备用. 1.3.2 活性成分的测定 1.3.2.1 总酚含量测定 参考吕俊丽[12] 等的方法,并略有修改.取200 μL 待测样品于

10 mL 具塞比色管中,加入

1 mL 福林酚 试剂,摇匀,加入

2 mL 15% Na2CO3 溶液,蒸馏水定 容到

10 mL,充分摇匀室温下避光反应

2 h 后,于波 长760 nm 处测定吸光值.以没食子酸为标准品,绘 现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2019, Vol.35, No.2

26 制 质量 浓度- 吸 光度曲线 ,得 到标准 曲线 为: y=0.26x+0.0938(R2 =0.9984) . 根据标准曲线可得其总 酚含量,红树莓果和籽提取物中总酚含量以每克红树 莓果和籽粉(干重)中总酚的毫克数表示,表示为 mg GAE /g,下同. 1.3.2.2 总黄酮含量测定 参考闫蕊[13] 等的方法,并略有修改.取200 μL 待测样品于

25 mL 的具塞比色管中, 加水至

6 mL 后, 加5% NaNO2 溶液

1 mL, 摇匀静置

6 min 后, 加1mL 的10% Al(NO3)3,摇匀静置

6 min 后,加入

10 mL 的1mol/L NaOH,用50%乙醇定容至

25 mL,静置

15 min, 在500 nm 波长处测定吸光值. 以芦丁为标准品, 绘制质量浓度-吸光度曲线,得到标准曲线为: y=0.976x+0.0906(R2 =0.9996) .根据标准曲线可得其 总黄酮含量,红树莓果和籽提取物中总黄酮以每克红 树莓果和籽粉(干重)中总黄酮的毫克数表示,表示 为mg RE/g. 1.3.2.3 原花青素、花色苷含量测定 原花青素用香草醛-浓硫酸法[14] 测定;

花色苷用 pH 示差法[15] . 1.3.3 细胞培养 HepG2 细胞在

37 ℃、5% CO2 的二氧化碳培养箱 中,用含 10% FBS、1%青霉素-链霉素溶液的 DMEM 培养基培养. 当细胞达 80%~90%密度时传代, 细胞生 长稳定良好即可使用.取对数生长期细胞接种于

96、

12 孔培养板进行实验. 1.3.4 细胞存活率的测定 细胞用 0.25%胰蛋白酶进行消化制成单细胞悬 液,计数,按每孔

200 μL、细胞密度 5*104 个/mL 接 种于

96 孔板中培养

24 h, 待细胞贴壁后, 吸弃培养液, 设置对照组(BC)和试验组,对照组加含 1% FBS 的DMEM 培养基,试验组加用含 1% FBS 的DMEM 培 养基配制的终浓度为