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9 k D) 分 别包 被Nu n c板(丹麦 ) , 每孔0 t . B蛋白,制成单 片段 抗HC V 抗 体检 测 试剂 , 分别检'

剜我 所研制的第 二代HC V― E I A 诊断 试剂 参 考血 清[ , 并计算阴性 均值()和SD值 , C u t o f f值以Ni +

2 S D计算 O D值≥c u t o f f值定为附性. 抗原活性强弱以 C u t o f f指数 s / c值和 F / 雨 值表示 , 值越高 . 括性越 好.维普资讯 http://www.cqvip.com 第4 期张庶民 等319结果1重组融合蛋 白C的表达 及免疫 印迹确 证 工程 菌用 I P TG诱导表达后 , 取适 量菌液离心 , 沉淀菌体用 S DS ― P AG E 电泳 , 考马氏亮 兰染邑. 结果发现诱 导后工程 菌较对 照菌体 多一条蛋 白带 , 分子量约 为3

9 k D, 与理论推导重组 蛋 白分子量 ( I

3 k D+2

6 k D,

2 6 k D为GS T分 子量) 相符 ( 如图2 ) . 将其命 名为 C 经 用激 光扫描仅 扫描测 定,C:约占菌体 总蛋 白量的

3 0 ( 如罔

3 ) . 利用免疫印迹 ( We s t e r n B l o t t i n g ) 对 其活性进 亍检 测,发现此蛋白能特 异地 与HC V 感染血清反应 而不与非HC V 感染血清反应(图d).说明蕞达 蛋 白具 奇HC V 抗原 活性 . 免疫 印遗 中出现 的低 分子小带 推测是 大肠杆 菌蛋 白与 人血清 交 叉反应 引起 的非特异反应 一图2 表达 蛋白c的sDs―PAGE电诛 分析 F i g .

2 An ~y s l s o f t h e r e c omb i n a n t C2

7 b y SI I ~ S - PAG E A : M a r k e r Bi E. c o l l~ ~n t r o t C : p G e x p k a s m i d c on t r o l D , p H C2

7 p l a s m i d E : T h e

0 u pe r n g

0 ~l nt F . Th e s e di m e n t G : t wa s h e

0 i ne J l ~ d . o n b o d y H ! T pu T i ~ O C27 图3 表达 蛋 白扫描固 F .

3 Sc u a n ni n g p i c t u r e t h e e x p r e s s e d r e c o m b i n a n t p r o t e i n

2 c 抗原的抗原活性研究将纯 化后 的Cz抗原及 C - 抗 原分 别包 被聚 苯乙烯板 , 利用ELLSA方法检 测我 国第二代 HCV E I A 质控参考血清.分析结果 如表 . 表1 用(、-1.('

?I组抗原检捌蓑国第二代 A n t i - H C V E I A厦控参考血清 O D值分布表 Ta b l ~ I Th e d i s t r i bu t i o n o f OD v a l u e o f t i l e~ e e on d g e n e r a t i o n a n t i - HCV EI A p a n e t

8 c m t e s t e d b y m m t a n t i ge n C u . C 维普资讯 http://www.cqvip.com

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0 中国病毒学第l0卷图4表选蛋 白C27的免 疫 印染 舒析 F -4 Ami ~ s o f t h e r e c omb i na n t C2

7 b y W ~t e r n Hl o ~ t l ng 表2 用CI],Ct7重组抗原检测裁置第二代 A n t i - H C V E I A质控参考血清 s / ~ 值分布表 T a b l e

2 Th e d i s t r i b u t f o n o f s / c v a t u e o f

1 h c s e c o n d g e n e r a t i o n a n t b HCV EI A p a l l e t s e r a t ~ t e d by r e c o m b 【 T

1 a m a n t [ g o n L ・ C 抗原An t i g e n Nx Ne v Px P e r P / N S S S P c u I ― S S s e u s t t i v h y ( 灵敏 度SP: s p e c i l i e e y ( 特 异性 ) I 维普资讯 http://www.cqvip.com 第4期张庶民等

3 2

1 从表l 、

2 、

3 中所列结果看 , C 阴性 O D值较 c 低,其阴性 OD均值为

0 .

1 3

3 , 而C阴性 OD 值均值 ( N ) 为0 .

2 6 J , 根据前 文介 绍的方法 计算 出的临界值 ( C u t o f f v a l u e )C 为0 .

2 9

1 , C l 为0.485.C阴性标本 O D值有9

7 个(99)分布在 临界 值 以下 , 而C有9

6 (

9 8 ) 个分 布在 临界 值以F, 有3

2 个(33)标本分布在

0 .

2 9

1 ~0 .

4 8

5 之间. 分析 阴性 标本的 S / c值,C有62(63)个标本 的S/c值小 于o .

5 , 而C只有4