PDF《番茄细菌性斑点病菌、 溃疡病菌、青枯病菌和疮》

45 s and the number of cycles was 35. The final concentrations of BW-F/BW-R primers, Fan1/Fan2 primers, RS-1-F/RS-3-R primers and XCVF/XCVR primers were 0.24,0.16,0.16 and 0.08 μmol ・ L-1 ,respectively. The expected sizes of amplification bands were 375,146,716 and

517 bp for BW-F/BW-R,Fan1/Fan2,RS-1-F/RS-3-R and XCVF/XCVR,respectively. The quadruple PCR can simultaneously detect Pst,Cmm,Rs and Xcv in infected plants tissue,with the detection limits of 0.1 ng ・ μL-1 gDNA. This study indicated that quadruple PCR might be a useful tool for rapid and sensitive diagnosis and provided an effective technical support for pathogenic identification Keywords : tomato ;

Pseudomonas syringae pv. tomato ;

Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis;

Ralstonia solanacearum;

Xanthomonas campestris pv. vesicatoria;

quadruple PCR 番茄生产上重要的细菌性病害主要有由丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato,Pst)引起的细菌性斑点病;

由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum,Rs)引起的青枯病;

由密执安棍状杆菌密执安亚种(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,Cmm)引起的溃疡 病;

由黄单胞菌属(Xanthomonas ssp)多个种(X. campestris pv. vesicatoria,Xcv;

X. euvesicatoria, Xe;

X. axonopodis pv. vesicatoria, Xav;

Xanthomonas perforans, Xp;

X. gardneri, Xg) 侵染引起 (Jones et al.,2004)的疮痂病.这4种病害的病原菌都可以通过伤口侵入、雨水传播,在田间或棚内湿度 大时极易扩展蔓延.细菌性斑点病与疮痂病在发病初期时症状较为相似,均可形成圆形或不规则形 褐色小斑点,病斑周围产生黄色晕圈;

溃疡病与青枯病均属于系统性病害,可导致维管束变褐腐烂, 植株萎蔫,发病初期难以区分.以上

4 种病原菌均可侵染番茄叶片、茎和果实,引起产量和果实品 质的下降.因此,迫切需要一种能够在番茄发病初期及时将病原菌检测出来的技术,以及时控制病 害的蔓延. 传统的对植物细菌性病害的诊断方法主要有田间症状观察、病菌分离培养、致病性测定等,但 存在诊断周期长、病原菌培养过程易污染、需要较丰富的植物病害诊断知识等问题;

运用生理生化 试验以及免疫学等方法对细菌进行鉴定,也存在着稳定性低、易出现假阳性结果、不能直接检测植 物材料中的病原菌等缺点 (尹燕妮 等, 2006) . 目前, 分子检测方法如普通 PCR、 巢氏 PCR、 RT-PCR 以及环介导等温扩增(LAMP)技术已经较为广泛的应用于番茄病原细菌快速、准确的检测. Zaccardelli 等(2005)根据 hrpZpst 基因设计细菌性斑点病菌 Pst 的特异性引物并成功建立 PCR 检测 技术,可从自然发病番茄的叶片、种子和果实中将 Pst 准确检测出来;

夏明星等(2006)针对溃疡 病菌 Cmm 建立了 RT-PCR 检测技术, 可以较快速地从发病植株以及种子中将 Cmm 检测出来;

Pizano 等(2016)建立了利用巢氏 PCR 检测植物组织和种子中 Cmm 的技术;

Singh 等(2014)根据 hrp 基因设计青枯病菌 Rs 的特异性引物,建立了基于 Bio-PCR 的检测技术,可将 Rs 从植物材料、灌溉 水以及土壤中检测出来;

黄雯等(2016)基于 lpxC 基因序列设计引物,建立了 LAMP 检测技术, 可检测番茄发病组织中的 Rs;

Park 等(2009)利用常规 PCR 技术扩增 rhs 基因家族特异性片段检 测疮痂病菌 Xcv. 多重 PCR 是在普通 PCR 基础上发展起来的一项检测技术,可一次性对多个病原菌(包括真菌、 Kang Huajun, Chai Ali, Shi Yanxia, Xie Xuewen, Yuan Junhai, Li Baoju. Quadruple PCR detection of Pseudomonas syringae pv. tomato, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,Ralstonia solanacearum and Xanthomonas campestris pv. vesicatoria in infected tomato tissues.