PDF《番茄细菌性斑点病菌、 溃疡病菌、青枯病菌和疮》

2256 Acta Horticulturae Sinica,2018,45 (11):2255C2264. 细菌和病毒)进行检测.Chen 等(2015)建立了小麦秆锈病菌、叶锈病菌以及白粉病菌的多重 PCR 检测技术;

罗文彬等(2015)应用多重 PCR 技术检测侵染马铃薯的

5 种病毒.目前,已有部分学者 针对番茄病原细菌建立了多重 PCR 检测技术.Ozdemir(2005)利用双重 PCR 技术检测溃疡病菌 Cmm 与疮痂病菌 Xav;

Umesha 和Avinash(2015)开发了可用于检测植物材料、种子以及土壤中的 青枯病菌 Rs 和疮痂病菌 Xp 的双重 PCR 技术.在田间,细菌性病害发生条件比较相似,并且可能存 在多种细菌同时侵染番茄的情况.而目前针对番茄病害的检测多为一个或两个的病原细菌,工作量 大,成本高,难以在短时间内实现病害的快速诊断. 本研究中拟以

4 种番茄细菌性病害病原菌为研究对象, 首先设计 Pst 的特异性引物, 并与 Cmm、 Rs 和Xcv 的特异性检测引物组合,筛选并优化四重 PCR 反应检测体系,开发出同时检测番茄

4 种 病原细菌的多重 PCR 检测方法,大大提高病原菌检测效率,为病害的早期准确诊断提供技术支撑.

1 材料与方法 1.1 供试菌株及其基因组 DNA 的提取 供试菌株的种名,来源及数量见表 1. 挑取番茄细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌以及疮痂病菌单菌落于 NA 液体培养基中,

28 ℃、180 r ・ min-1 振荡培养

18 h.分别参照细菌基因组试剂盒和植物基因组试剂盒(北京天根生 化科技有限公司)说明书进行基因组 DNA 的提取.提取出的 DNA 于C20 ℃保存. 表1供试菌株 Table

1 Isolates used for selection of specific primers in this study 种名 Species 引物 Amplification with primers BW-F/BW-R RS-1-F/RS-3-R Fan 1/Fan

2 XCVF/XCVR 丁香假单胞菌番茄致病变种 Pseudomonas syringae p........