PDF《ICS 13.100》

721 型或

751 型分光光度计;

b) 一氧化碳气(钢瓶或用如 B.2 介绍的一氧化碳发生器) ;

c) 钢瓶普氧;

d) 钢瓶普氮;

e) 血液稀释液(Tris 液) :称取三羟甲基氨甲烷(分析纯)1.21g,溶于

1000 ml 热蒸 馏水中;

f) 连二亚硫酸钠(分析纯) . B.1.3 操作步骤 B.1.3.1 取10ml 具塞试管

2 支(一支为试剂空白管,另一支为测定管) .各放入

2 粒玻璃珠 并加满 Tris 液(约13~15ml,体积差异不影响测定准确度) ,空白管加入 40mg 连二亚硫酸 钠,颠倒混匀. B.1.3.2 用血色素管吸耳垂血 5?l,放人测定管中,加连二亚硫酸钠 40mg;

补满 Tris 稀释 液后盖塞(勿进气泡) ,颠倒混匀.10~15min 后比色. B.1.3.3 将试剂空白管和测定管待测液分别倒入 1cm比色皿中.加盖(勿进气泡) .以试剂 空白液调零点,记录测定液

420、432nm吸光度值(即人A

420、A432) . B.1.4 饱和度计算 HbCO 饱和度按下列公式计算:

100 ) ( ) ( (%)

420 420

432 432

432 420

432 420

420 432 * ? ? ? ? ? ? = Hb HbCO Hb HbCO Hb Hb a a A a a A a A a A HbCO 式中:Hb 及HbCO 液在

420 及432nm 波长的吸光系 数. Hb a420 Hb a432 HbCO a420 HbCO a432 B.1.5 吸光系数的测定 B.1.5.1 取不吸烟,不接触一氧化碳气体的健康人血 2ml,加抗凝剂肝素 1%,保存待用. B.1.5.2 取一

5 ml 试管,吸此原血 0.5 ml,用Tris 液2ml 稀释. B.1.5.3 取上述稀释血 0.15~0.2ml,放入 100ml 锥形瓶中,加入 60mlTris 液混匀. B.1.5.4 HbO2液的制备:将B.1.5.3 血液稀释液通氧 20min(30ml/min) . B.1.5.5 HbCO液的制备:取B.1.5.4 HbO2液的一半,放入干燥的 50ml锥形瓶中,通一氧化 碳20min(30 ml/min) . B.1.5.6 取一 10ml 试管,装满 B.1.5.5 HbCO 液,再加入连二亚硫酸钠 40mg.盖塞(勿进 气泡) ,混匀,待测. B.1.5.7 Hb液的制备:将剩余的一半B.1.5.4 HbO2液通以湿化氮气(即将氮气通过盛有常温 蒸馏水的容器,以使水蒸气饱和) ,15min后,装满另一支

10 ml试管.并加入

40 mg连二亚 硫酸钠,盖塞(勿进气泡) ,混匀待测. B.1.5.8 按B1.3.3 条件读取 B1.5.6 HbO 液及 B1.5.7 Hb 二液在

420、432nm 波长的吸光度 值,即为: Hb a420 、 、 、 Hb a432 HbCO a420 HbCO a432 B.1.6 注意事项 a) 连二亚硫酸钠在空气中易失效,应以小瓶分装使用.避免接触空气和水分. b) 吸光系数测定必须采用新鲜血液. c) 吸光系数值应定期核检. d) 含HbCO 的测试液应尽量避免接触空气,及时比色,否则会造成结果偏低. B.2 一氧化碳气发生方法 在装有滴液漏斗和气体导出管的烧瓶内加入 85%甲酸 (分析纯) . 自滴液漏斗加浓硫酸. 产生的一氧化碳导入 2%NaOH洗气瓶后涌入HbO2液中,操作应在良好的通风橱中进行. ........