PDF《,朱彩珠 2 ,葛艳1》

端分别加入含 B a m H I 和Hi n d I I I限制性酶切位点序列 . 以FMD V毒株基 因组 R NA为模板, 利用 R T . P C R技术扩增

3 a b c基因, 得 到的基 因片段 与 T载 体连接 , 转化 D H5 Q.提取重组载体 p T .

3 A B C,经BamHI,胁dIII双酶切后与载体 p E T

3 2 a连接 ,转化宿主菌 B L

2 1( D E

3 )p l y s S , I P T G 诱 导表达 目的蛋 白.S DS . P AG E 及We s t e r n B l o t t i n g 检测 和鉴 定结 果表 明 ,在大 肠杆 菌 中成功 表达 了NSP-3ABC蛋 白,分子量约

5 6 k Da ,且该表达产物可 与FMDV感染的动物血清产生免疫反应 . E L I S A试验结果显 示 ,表达蛋 白可用于 F MDV注 苗与感染动物 的鉴别诊断 . 关键词 :口蹄疫病 毒;

非结构 蛋白;

克隆;

表达 中图分类号 :$

8 5

5 .

3 文献标识码 :A 文章编 号:

1 0

0 3 .

5 1

2 5(

2 0

0 3 )

0 2 .

0 1

5 5 .

0 4 口蹄疫是家畜和野生偶蹄动物 的烈性传染病 , 可引起大范 围的易感动物感染发病 ,造成 巨大的经 济损 失.C o wa n[ 等于

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6 6 年发 现了口蹄 疫病毒(Foot.and.mouthdiseasevirus F MDV) 的一种非结 构蛋白抗原 ,研究 显示 ,该 抗原仅 与 受感染 的动 物血清反应,该抗原被命名为病毒感染相关抗原收稿 日期 :2

0 0

2 .

0 8 .

2 7 ,修回日期:

2 0

0 2 -

0 9 .

0 9 作者 简介 :尤 永进 (

1 9

6 5 ・ ) , 男,江 苏省 苏 州籍 ,副研 究员,硕士 ,主 要从 事兽 医分 子生 物学 研究. E. ma i l : x ml l @s a a s . s h. c a 维普资讯 http://www.cqvip.com

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6 中国病毒学第18卷 ( v i r u s i n f e c t i o u s a s s o c i a t e d a n t i g e n . VI AA) . 此后,基于此原理建立了琼脂糖凝胶免疫扩散试验(AG I D) , 即通 过检 测动 物血 清 中相应 的VIA抗 体存在与 否 ,来 鉴别 确 定该动 物 曾否接 触 、感染 过活 的 口蹄 疫病 毒 .但 是 ,随后 的研 究确 认,VI A 抗原是病 毒的RNA聚合酶(病毒基因组

3 D 区段),是 F MDV 复制过 程 中不 可缺 少 的成份 ,因此 在 目前 生产的口蹄 疫灭活 疫苗中也必 然含 有 一定数 量的VI A 抗原.动物 在 多次接 种 灭活 疫苗 后 ,血 清 中的 VI A 抗体含量必定有所增高,从而影响了鉴别诊断的准 确性.近1O年来,英、美、荷兰等国学者对 F MD V 的非 结构 蛋白(Non.structuralprotein,NS P . )2 C、

3 A、3 B、3 A BC等片 段作 了大量 细致的研究 ,建立了酶 联 免疫吸 附试 验(ELISA) , 适用于鉴别 诊 断感 染和 注苗 动物 .

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9 7年在 荷兰 召 开的有 关学 术研 讨会上,与会学者确认用生物工程技术制备的NS P .

3 A B C作 为抗 原的ELISA方法 是 区分 F MD感染和注 苗动 物 的理想 方法 j .

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9 7年美 国UBI公司 对FMDV 非结 构蛋白用 于 诊断 的研 究成 果 申报 了美国专利 j ,1

9 9 9年 该公 司推 出 了以合 成肽

3 B 作 抗原 的 间接 E L I S A诊 断试 剂盒 , 正在包 括 中国在 内 的多个国家进行区域试验.国内这方面的研究起步 较晚,投 入很 少,尚未 有成 功产 品推 出. 本研 究利 用 反转 录PCR(RT.PCR)技术,扩 增 得到 F MD V NS P .

3 A BC蛋 白的基 因片 段,在大肠 杆 菌载 体 中克 隆、表达 NS P .

3 AB C蛋白,并对 其作 为鉴别 诊 断抗 原 的可 能性 作 了初步 的研 究 ,为研制 口蹄疫 鉴 别诊 断试剂 盒 奠定 了基础 .

1 材料 与方法

1 .

1 口蹄疫病毒 毒株 为.型FMD V, 由中国农 业科 学 院兰州 兽 医研 究所 提供 .