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8 一 质粒 重组体 D NA 片段 , 经 自身 连接 后转化F. ∞ J M

1 0 9, 成功地 获得 l

3 株缺损 突变 体(图l , B

7 一B

3 ) . 在pSTY2

8 D NA 片段 的0 .

9 2 一I.22和I.79d一2.094kb区段,分别设计合成特异性引物A和B.引物A序列为3CTCGACAAAA T A T T T G G AG T T T ;

引物 B序列为3 G T C A C T T~ T T T A T T C G T C A G

5 , . 各突变体DNA和 引物 扩增 的DNA 区段相互衔接 , 复盖全部 p S T Y2

8 DNA 片段 ( 图1 ) . '

O pS TY2

8 DNA (

3 . 骶b)1.02.

0 3 .0 ・ O k b 图JpsTY28DN^的蛱 揖突变 体―表示映损舞变体, ―表示 H Hv一6 D N A的特异性引物 R i R O R F从J

0 7 b p延伸到2

5 2 J b p } P

4 1从2

6 3

7 至3

7 3

7 b p f E .I D l e t i on 虹lm肺 b o f

0 STY2

8 DN A.― 蹦毗i o n m u t a n t a ― S p e d p r i m~ . fH HV一6DNA-P J R ORF e x t e n d i n g f r o m

1 0

7 b .

2 52 J b p'

P4I ORF f r o m

2 6

3 7 h 口to3737hD2HHV6pST Y

28 . D I N A 序列罔2 核苷酸序列显示,'

pSTY2

8 D NA 片段 共有3971个核苷 酸.用DNAS I S 系统作分析,发现含 仃2 个开读框 架( ORF) , 一为Ri R O RF,推测性起始密码 ATG 位于核苷 酸1

0 7 - -

1 0

9 ,终 止密码 T AA 位于核~

2 5

1 9 - -2

5 2

1 , 全长 为2

4 1

4 个核 苷酸 , 可 编码8

0 5 个 氮基 酸的蛋 白质 , 估蛆^Bq如蝴啦 维普资讯 http://www.cqvip.com 第4 期 钱年 I 『 生荨 l 编码人疱黼 毒一 B 型接 _ 桉苷酸还髓 和刚l蛋白基因的克隆和序列测定

3 1

1 计该蛋白约 为9

3 .

3 *

1 0

3 道尔顿;

二为P4

1 O RF, 起始密码ATG 位于核苷酸2637―2639,终止密码 TGA 位于核苷酸3735―3737.3HHV

6 Ri R 与其他疱疹j 岗毒 Ri R氨基酸顺序 的同潺性 比较 DNAS L ~ ;

系统分析结果见表

1 , HHV一6Ri R 更接近HC MV Ri R, 两者之间氨基酸同源性 的最适记分(Op t i mi z e d s c o r e ) 为459,起始记分(Initialscore)为159.与.c. J M l

0 9 Ri R 作比较,l束发现同源性,起始记分 小于50.表1 H H v 一6腿与其它捌 睛毫R皿Ta h i ti An '

d n ~ a c i d h o ~o l o g y b 吐嗍HHV 一6Ri R a n d o t h e r b e 坤嚣岫r呻*上半部为氨基酸配对百分值 I 下半部为最适记分} 括号内为起始记分 Up p c r p a n f o r p r ~ n t a mi n o a c h i ma t c hI Lo we r p t蕾0roptimi z e d

8 0 a r e I I n i 眦鼬. i n t he br ~ h e t 讨论HHV一6HS T 株 为幼 儿急疹病原体嘲 , 理化特 性研 究表 明, 该病 毒类 似疱疹 病毒 , 部分 核酸进行分子生物学研究,发现与HC MV 密切相关.Ni c h o l a s [ 一等分析HHV一6Ul102株

3 8 .

5 k b的 核苷酸 序列,发现其 中的 P

2 LF

2 和EPLF

1 与HCMV UL3

8 和UL

4 4 D NA 片段 同源,分别编码 Ri R和P41蛋 白. 对HS T株DNA 内切酶 图谱 分析 , 发现 p S TY2

8 DNA 片段位 于HHV

6 U

1 ]

0 2株的P2LF2和EPLF1区段 , 由此选 择pSTY2

8 作测序研 究,成功地完成 了该 片段 DNA 全序列测定.图2显示pSTY2

8 片段 的DNA 序列,全长为3971个棱苷酸,包含两个ORF, 其中RiRORF 的DAN 序列测定在国内外尚未 报道.HHV・

6 对淋 巴细胞有 嗜性 , 在体外培养时 主要感染 T淋 巴细 胞,HC MV 的感染则 以纤维 母 细胞 为主 , 因而 曾将该病毒列为 疱疹病毒口 . 但分子 生物学 研究及 D NA 序列分析表 明,该病毒 与HCMV 类似 , 应归属于 疱疹病毒 _ ] ] . 我 们利用 D N A S I S系统 , 分析 HH V一6RiR, 并与其他疤疹病毒作同源性 比较 , 发现HHV.