PDF《五、操作步骤》

重复操作直至所有溶液全部过滤完毕. 8.加入 10ml 去蛋白液 PE,10,000rpm 离心

5 分钟,弃掉废液. 9.加入 10ml 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!) ,10,000 rpm 离心

3 分钟,弃滤液. 重复漂洗一次,10,000 rpm 离心

3 分钟,弃滤液. 空柱 10,000rpm 再离心

5 分钟,除去残留乙醇. 10. 取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 1-1.5ml 洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 60-70℃水浴中预热) , 室温放置

1 分钟,13,000rpm 离心

3 分钟,收集下滤液. 11. 将上步所得滤液加入到纯化柱 ED 中(柱容 750?l,滤液可分两次过 柱),13,000rpm 离心

1 分钟.收集下滤液,下滤液中含有 DNA,可 立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存. 注意:洗脱缓冲液 EB 组成为低浓度 Tris-HCI(pH8.0) ,不影响测序 和酶切反应.把水或洗脱液加热至 60℃使用时有利于提高洗脱液效 率.

二、原理简介 本试剂盒采用改进 SDS-碱裂解法裂解细胞,粗提物选择性结合离心柱, 然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐,低PH 值状态下选择性地结合溶液中 的质粒 DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除, 最后 低盐,高PH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅基质膜上洗脱.

三、试剂盒特点 1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱 与柱之间吸附量差异极小,可重复性好.克服了国产试剂盒膜质量 不稳定的弊端. 2. 独有的去蛋白液配方,可以高效去除残留的核酸酶,即使是核酸酶 含量丰富的菌株如 JM 系列、HB101 也可以轻松去除.有效防止了 质粒被残留的核酸酶降解. 3. 独特内毒素清除配方,清除内毒素效果一般小于