PDF《解放军 萎》

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第9卷 第 2期

1 0

0 4年 6月 中国病毒学ⅥROLOG I CA SI N I CA

7 . ( F ) V

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2 J un. 】

99 1 乙型肝炎病人尿细胞中 H B V的实验研究 谭 维国 李法卿 吴玉强 一一吴德福. 龚希 平(南京军 区军事 医学研 究所 , 南京210002):萎..210003)Rf如'

(解放军第,卜医院,南京{)l 一口./l提要 本文采用间接免疫荧光法(

1 i d, R P H A法,ELISA法及斑点杂交技术检测

1 0 傅 无症状 H B - . &

携带者 及89傅 乙肝病 人尿细胞 中的 Ⅷ A g 、 阳As及 H B V D N A, 发现屎细胞 中有 H B s A g 、 I - m e k g 、 I - m '

VD N A存在 . 结果提示 乙肝无症状携带者及乙肝病人昧细胞中具育 } E I s A g 、 H B o A g 、 邢vII~TA, 因此更进一步证实尿液具有传染性. . , . 煳词 , H B V D N 晰r'

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I,病毒性 乙型肝 炎(乙肝) 病 人及 无症 状HBsA8携带者尿 中存 在HasAg业 已被证 . - , 并 肯定了尿液有传染性叫. 但 尚未 见乙型肝炎病 人尿细 胞中检 出HBsAgHBeAg的报道 . 我们于

1 9

8 9 年 对无症状 H I M A $ 携带者和乙肝病 人的尿细胞进行了检 测,结果发现无症状 携带者和 乙 肝病 人尿细胞 中有 HB s A

8 I - I B c A g 、 H BV DN A存在 , 现将结 果报告如下 . 材料和方 法1材料1.1临床诊断为乙肝无症状携带者

1 0 悄{计缶床诊断为乙肝病 人8 g 悄.其中急性 肝炎

2 6 悄,慢性 活动性肝炎 ( 慢活肝)

4 2 例,慢性迁延性肝炎( 慢迁肝) I

3 例,重型肝炎( 重肝)

8 倒,均符台 I

9 9

0 年 海病毒性肝炎学术会 议 修订 的病 毒性肝 炎 防治方 案(试行) 中的诊断 分型 标准.

1 .

2 选择 H卧g、抗一H、I-~e A g 、 抗一HB c 、 抗一胁均阴性 的健康 者30倒 为阴性 对照 .

2 标 本收纂 殛处理 收集晨尿

3 0

0 ~5

0 0 m l 于无菌广口瓶中 , 先取

2 m l , 用联苯胺法检查隐血, 余下的所有尿液置于

5 0

0 m l 离心 管中,3000r/m离 心10分钟 , 弃上 清,加0.01too l / Lp H

7 .

2 P 日 s连续 洗涤3次 , 沉 淀物 加入

0 _

0 1 n v o l / L P f i S

1 叫,混匀后用接种环挑取涂片 , 每人份每张涂

2 孔,涂2张,吹干, 冷丙酮固定

3 0分钟 , 吹干、 待检. 余下的尿细 胞悬液于一2

0 C 反复 冻融

5 次,3000r/m离心

1 0 分钟 , 弃去沉淀 , 上清置于一2

0 C 保存待 检,所有尿标奉隐血 试 均为 阴性 . 采尿同时采血

3 ~5 r n l , 分离血清 , 置一2

0 C 待检.

3 检测项 目及方法

3 .

1 尿细 胞涂 片检澳j 邛Ag、}mc A g 按 常规 间接免疫 荧光法 (

1 F ) 检测 . 阳性 标奉均 进行 阿【断试验 加 以证 实.3.2尿细胞冻融 液 的上清 检涮 l - ~s Ag 采用 RP H A法,H卧g采用 E L

1 S A法 ・车文

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9 2 年 9月8 H收到 .

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9 3 年 7月

1 2 H修回 维普资讯 http://www.cqvip.com 第2期谭维国等 : 乙型肝炎病人屎细胞中 HB V的实验研究

1 0 l

3 .

3 HB v D N A 检测 取HB s A g 、 ] - I B e A B均 阳性 的尿 细胞 冻融 上清 2份・58000r/m离心 4小时 , 弃上 清,沉淀加0.5ml0.01mol/Lp B S , 混匀 , 低速离心 . 取上清

0 . ~ S t n l 在硝酸纤维素膜上抽滤点样 , 同时点 I - I B VD N A阳性 对 照和 阴性 对照 , 然后进 行变性 、 中和 、 烘烤 、 预杂交 、 杂交 、 膜 片漂洗 、 封闭 、 亲和 、 漂洗、显色 ・ 再 弃去 显色液 , 用蒸馏水冲洗膜片. 出现兰紫色斑点者为 H B V D N A阳性. 与标准膜 片色列 比较 , 估计标本H B V D b I A含量 . 其 斑点杂交溶液配制及实验程序详见上海医科大学科技服务部提供 的《 非放射性 乙型肝炎病原基因诊断试剂 , 说 明书 . 结果1尿细胞涂片检测