PDF《(DLAT/E2)酶联免疫吸附测定 试剂盒使用 说明书》

100 ,酶标板加上覆膜,37 温育

2 小时.

2、 弃去液体,甩干,不用洗涤.

3、 每孔加检测溶液 A A A A 工作液

100 (临用前配制) ,酶标板加上覆膜,37 温育

1 小时.

4、 弃去孔内液体,每孔用

400 的洗涤液洗涤,浸泡 1-2 分钟,甩干(也可轻拍将孔内 液体拍干) ,重复洗板

3 次.最后一次洗涤后,要把孔内的洗涤液完全甩干.

5、 每孔加检测溶液 B B B B 工作液(临用前配制)100 ,加上覆膜,37 温育

30 分钟.

6、 弃去孔内液体,甩干,洗板

5 次,方法同步骤 4.

7、 每孔加底物溶液

90 ,酶标板加上覆膜,37 避光显色(反应时间控制在 15-25 分钟 , 不要超过

30 分钟.当标准孔的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色,后3-4 孔梯度不明显时, 即可终止) .

8、 每孔加终止溶液

50 ,终止反应,此时蓝色立转黄色.终止液的加入顺序应尽量与底 物溶液的加入顺序相同.如出现颜色不匀一,请轻轻晃动 酶标板以使溶液混合均匀.

9、 在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后,立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光 密度( 值).注注注注意 意意意:

1、 试剂准备:准备一次实验所需要的酶标条,其它的可从微孔板上拆下,密封,按照说 明书要求保存,以备下次使用.

2、 加样:实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染.加样时注意不要有气泡,将 样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.加样或加试剂时,第一个孔 与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 预温育 时间,从 而明显地影响到测量值的准确性及重复性.因此,一次加样时间(包括标准品及所有 样品)最好控制在

10 分钟内.推荐设置复孔进行实验.

3、 温育:为防止样品蒸发,实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内,以避免液体 蒸发,洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态,同时应 严格遵守给定的温育时间和温度.

4、 洗涤:充分的洗涤非常重要,在每次洗涤过程中,都要将洗涤液完全甩干.洗涤过程 中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要 消除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶标仪读数.

5、 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔

10 分钟观 察一次) ,如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪 光密度读数.

6、 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射. 洗板方法 洗板方法 洗板方法 洗板方法

1、 手工洗板方法:将推荐的洗涤缓冲液至少 0.4mL 注入孔内,浸泡 1-2 分钟,吸去(不 可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力 拍几次;

根据需要,重复此过程数次.

2、 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中. 计算 计算 计算 计算 各标准品及样本 值扣除空白孔 值后作图(七点图) ,如设置复孔,则应取 其平均值计算.以标准品的浓度为纵坐标(对数坐标) , 值为横坐标(对数坐标) ,在 对数坐标纸上绘出标准曲线(最佳方程式应依回归方程计算的 R2 值来定,以R2 值越趋近 于1为好).推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如curve expert 1.3,根据样品 值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释倍数;