PDF《BioEasy SYBR Green I Real Time PCR》

1 BioEasy SYBR Green I Real Time PCR Kit BioEasy SYBR Green I 荧光 PCR 试剂盒说明书 TECHNICAL SUPPORT: For technical support, please dial phone number :0086-571-87774567-5215 or 5211, or fax to 0086-571-87774553 Email to reagent@bioer.

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一、 前言 本试剂盒是采用核酸扩增技术结合 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 Real Time PCR 的专 用试剂,可以快速正确地对目的基因进行检测、定量.本试剂盒提供 2*PCR 反应液,包含 了除 Taq 酶与引物之外的其它所有组份.使用时只需加入引物、模板、Taq 酶即可进行 Real Time PCR 反应,操作非常快捷简单. SYBR Green I 是一种荧光染料,能特异性地掺入到双链 D NA 分子的小沟部位,发射荧 光信号.在PCR 反应体系中,当SYBR Green I 染料与双链 DNA 结合,在激发光的作用下发 出荧光,通过荧光强度的测定,即可确定双链 DNA 的含量.荧光染料的优势在于它能监测任 何dsDNA 序列的扩增, 不需要探针的设计, 使检测方法变得简便, 同时也降低了检测的成本. 并且在 PCR 结束后可直接进行融解曲线反应分析. 通过融解曲线的分析, 能判断是否存在着 变异或非特异性的扩增. SYBR Green I 的最大吸收波长约为 497nm, 发射波长最大约为 520nm.

二、 试剂盒组成 货号 BSB03M1 BSB03L1 试剂盒组成

100 人份

200 人份 2* SYBR Mix (with 4.0mM Mg2+ )

1250 ul*2

1250 ul*4 Taq DNA Polymerase

32 ul

32 ul*2 25mM MgCl2

1000 ul

1000 ul*2 ddH2O

1000 ul*2

1000 ul*4 ROX Reference (50* )

100 ul

200 ul -20℃ 避光保存,避免反复冻融

三、 适用仪器: Line-gene 荧光定量PCR 检测系统及其它同类仪器.

四、 试剂盒质量控制 该产品以质粒 DNA 为模板, 在Line-Gene 荧光定量 PCR 检测系统上扩增, 至少扩增 四个梯度,其相关系数小于等于-0.980.

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五、 重要参数

1 模板 本试剂盒适用的模板为质粒 DNA(10-10

7 拷贝) 、基因组 DNA(100pg-1ug)和cDNA(1pg-100ng).为得到最好的实验结果,扩增的片段长度应在 80-500bp 范围内.

2 引物 引物是 Real Time PCR 反应的重要参数之一. 在引物设计时, 建议使用 Oligo、 Primer

5 等引物设计软件.在PCR 反应时,引物终浓度通常在 0.1uM-0.5uM 之间调整,一般终 浓度为 0.2uM 时可得较好的结果.

3 镁离子浓度 本试剂盒的PCR 反应液已含有终浓度为 2.0mM的镁离子, 一般情况即可得较好结果. 但对于扩增不同的目的片段,镁离子终浓度可作适当调整.本试剂盒中附送一管 25mM 氯化镁.根据下表使用量,对镁离子终浓度作调整:

4 ROX Reference Dye ROX Reference Dye 在使用 ABI、Stratagene 等公司的荧光定量 PCR 仪上,用以校 正孔与孔之间产生的荧光信号误差.具体如下: 镁离子终浓度(mM) 加入 25mM 氯化镁的量(ul) 3.0

2 4.0

4 5.0

6 6.0

8 仪器 每50ul 体系加入 ROX Reference Dye (50*)的量(ul) ABI7000, 7300, 7300, 7900HT, 7900HT Fast

1 ABI7500,Stratagene Mx3000, Mx3005P, and Mx4000 0.1

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六、 使用方法:

1 取出 2*PCR 反应液、ddH2O,进行室温解冻,上下轻缓颠倒混匀,在配制前可进行短暂离 心.

2 PCR 反应液配制组分: (反应液配制时请在冰上进行) 试剂组分 体积(ul) 2*SYBR Mix(with 4.0mM Mg 2+ )

1 25 PCR Forward Primer (10uM)

1 PCR Reverse Primer (10uM)

1 Taq DNA Polymerase 0.3 ddH2O 18.7 模板

2 4 Total

50 ① PCR 反应液内含 PCR buffer、 Mg 2+ 、dNTP mixture、SYBR Green I 等. ② 因不同种类的 DNA 模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释确定 最佳的 DNA 模板添加量.