PDF《Fast HiFidelity PCR Kit》

Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057/400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.

, LTD. 本产品仅供科研使用.请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途. 产品组成 KP202-01 KP202-02 (50 ?l*50 rxn) (50 ?l*200 rxn) Fast HiFidelity Polymerase

125 U

500 U 5*Fast HiFidelity PCR Buffer*

500 ?l 2*1 ml 20*Fast PCR Enhancer

500 ?l

500 ?l 5*DNA Loading Buffer

500 ?l 2*1 ml *内含dNTPs,Mg2+ ,稳定剂、增强剂和配体A/B等. Fast HiFidelity PCR Kit Fast HiFidelity PCR 试剂盒 目录号: KP202 储存条件: -20℃可保存1年浓度: 2.5 U/?l 产品内容: 版本号: KP171207 产品简介 Fast HiFidelity Polymerase是从超嗜热原始菌 Pyrococcus spp中分离纯化的,具有超强的3'-5'外切 酶活性(Proofreading活性),保真性约为Taq DNA Polymerase的80倍.本产品采用了创新的合成亲和 性配体技术,配体以一种温度依赖性的方式来抑制聚 合酶和外切酶的活性,配体A在常温下能够抑制DNA Polymerase活性,从而有效减少非特异性扩增;

配体B能够抑制3'-5'外切酶活性,可防止引物和模板 DNA的降解,无需额外的激活步骤即可进行高特异性 的Hot Start PCR. 本产品通过添加独有的延伸增强因子,使延伸速 度和扩增产量得到了显著提高.反应Buffer系统包含 dNTPs,增强剂,稳定剂,拥有特殊的Mg2+ 自动调节 系统,在整个反应过程Mg2+ 始终保持最佳浓度,提高 扩增效率.其PCR产物为平末端,可加A处理再与T 载体连接或使用平末端克隆载体,如TIANGEN 零背 景快速连接试剂盒(目录号:VT204). 质量控制 经检测无外源核酸酶活性;

能有效地扩增人基 因组中的单拷贝基因;

室温存放一周,无明显活性改 变. 产品特点 1. Fast HiFidelity Polymerase具有超强的3'-5'外切酶 活性,保真性约为Taq DNA Polymerase的80倍. 2. 本产品通过添加独有的延伸增强因子,使延伸速度 和扩增产量得到了显著提高,延伸速度可提升至 15-30 sec/kb,比Taq DNA Polymerase快2-4倍. 3. 本产品采用了创新的合成亲和性配体技术,无 需额外的激活步骤即可进行高特异性的Hot Start PCR. 扩增片段大小 人基因组DNA ~6 kb 大肠杆菌基因组DNA ~10 kb cDNA ~6 kb λDNA ~15 kb 注意事项 Fast HiFidelity Polymerase的PCR扩增产 物进行琼脂糖电泳时,请使用本产品中5*DNA Loading Buffer,否则电泳带可能出现扩散现 象,但不影响电泳结果的分析. 操作步骤 一PCR反应液的配制: 反应体系:应在在冰上配制反应体系,所有的 试剂使用前均要充分混匀. *引物终浓度为0.4 ?M可以在大多数体系中获得良好的扩增结 果.扩增效率不高时,可增加PCR反应体系中的引物浓度;

适当减少PCR反应体系中的引物浓度则可以增加PCR反应特 异性.如有必要,可以在0.2-1.0 ?M间进行优化选择. 组成成分 体积Template *** Primer 1*(10 ?M) 2.0 ?l Primer 2*(10 ?M) 2.0 ?l 5* Fast HiFidelity PCR Buffer 10.0 ?l Fast HiFidelity Polymerase 1.0 ?l (20* Fast PCR Enhancer**) (2.5 ?l) (DMSO****) (1-2.5 ?l) ddH2O 至50 ?l **20*Fast PCR Enhancer对一些复杂模板的扩增有 明显改善,当扩增效果不佳时请尝试添加使用. ***模板DNA量请参照如下(50 ?l PCR反应体系) ****对于GC含量高的片段,PCR扩增时加入终浓度 2-5% DMSO可改善扩增效果.如果使用DMSO, 请使用三步法,或使用Tm值68℃以上的引物. 二PCR反应条件: 1. 使用Fast HiFidelity Polymerase进行扩增反应时, 请先使用三步法.进行三步法扩增时,为了获得最 佳的扩增效果,建议按延伸速度30 sec/kb进行设 定. 模板类型 模板用量范围 推荐模板用量 基因组DNA 5-200 ng 100-200 ng 质粒DNA 0.1-100 ng 1-10 ng cDNA 50-200 ng 50-100 ng λDNA