PDF《第 8卷 第 4期》

3 m ! 提取液混合用于点样.

6 .

2 N C M的处理 将NCM攫入去离子水巾

5 分钟 . 加入 T ~ S (

0 .

0 1 r a ~ / L. n . } 埘,pH7.5,0.9%N e C I )

1 0 分钟一取出即 可用于 点样 .

6 ・

3 点样 取处理好的 N c M, 放置在装有抽滤设备的点样器上 , 抽滤点样 ,

4 倍系刊稀释样品液 , 每样品点

2 5 山, 点 样后 置37℃干燥 1小时,或室 温干燥 2小 时即可 .

6 . { 封膜 第 一抗体 , 第 二抗 体 反应 点 样后 的NCM用5蚓州 溶液( 于T碰- | f - )

3 d ℃封闭2小 时.不经洗 涤,转入第 一抗体 溶渡 ( 免抗 p V X、 p V S和pry.I.5/rn1),稀释液 为TBs+2 P v P +

0 .

2 N F M,

3 d ℃温育3小时 , 取出 于'

rBS-T~I { - 洗 潦三 次,每次 5分钟 一 加入 GA R ・ A P ( I t I ∞0 ) .

3 ,

1

1 2 反应3小 时.如上 洗涤 , 而后 放入 显色{ 直・}】显色

1 5 ~3

0 分钟 .阳性反应为蓝紫色斑点 , 阴性对照为绿色或无色.上述的封闭 、 第一抗休反应 、 维普资讯 http://www.cqvip.com

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8 中国病毒学第8卷 G A R - A P反应、 显色反应均在

1 2 X8 c m塑料袋 中进行.

7 C o c k t a i l - E I A S A 本实验与

1 3 w ~ - E L I S A相 比较 . N C M的处理 、 样品液 的制备 、 点样膜的封闭 、 所用的洗涤液 完全相同 . 不同点只是第―抗体和酶标记第二抗体( G A R - A P ) . 同时加入 . 保温反应 3小时即可显色. 结果lDot-F.,LISA用Dot―ELISA对 纯化的 P V X、 P v Y和PVS及感染上 述三 种病 毒的烟 草、马镥 薯休眠块茎的顶 端以及 马铃薯块 茎的芽分别进行测定 . 结果 见表 l及图l和2.从图及 表中可 知以 N C M 为固相 载体 , 应用 问接 E L I S A法测定提纯病 毒、感病 毒烟 草、休眠块 茎顶端和块茎 芽时 , 其灵敏度或汁液稀释度 P V Y分别达到

2 .

7 6 p g 、

1 /

8 1

9 2

0 、 I

1 5

1 2

0 和1/20480;

PVX分别达 到2.835pg,1/20480~I

1 8

1 9

2 0 , I

1 5

1 2

0 和l/sl20~1

1 2

0 4

8 0 ;

P V S 分 别达到

5 .

8 3

1 p

8 、 I /

8 1

9 2

0 ~

1 1

3 2

7 6

8 0 、 l / S l

2 0 ~ l /

2 0

4 8 0和l/20480~1181920.E、b为纯化 的P、 bPu 丘edP、 ( El b ) c为齄康粗 什藏H∞n h y ( c ) a b 为纯化的bP 鲥FV X ( n. b) c为健康粗 汁液H酣 t h y ( c) E 、 b为纯化 的Pvs Pu 日PVS( 日. b ) C为健康粗汁 液、1-Ieolmy( C) 图l应用瞰_ELLSA检溯纯化的 p V Y ( ^) F V X ( B ) 和PVS(C) F 培lDc l e c ~ i o n o f p f li e d pVY (A) PVX (B ) a n d P V S( c)b y E n ― z m eLi n k~l I m- 啪un } b e n t As - 鞠叩Ni t r o ( w A l u l

0 啦Idnh 心(Do t - ~ ) 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 4期 孟清等l应用Do t - E L I SA 检测 P VX、 PV Y 和PVS369磕染PVX的烟 叶 汁液 , b . c ) d为健康 汁液 . Sa p f r o m Pvx i n, s c ud∞ I ~ a v e s , b . c ). H 时(d)感染 P v s 的烟叶汁液(

8 . b , c ) d身硅康汁液 S a pf r o m pVS i n f e c t e d ∞0 L e a v e s ( a........