PDF《@江薄大擎》

为进一步确认AN的主要毒性 代谢产物(氰氢根离子,CN'

)对CYP2E1的影响,腹腔注射3 mg/kg氰化钾 (KCN),分别测定染毒后15 min、0.5 h、l h、3 h和6 h肝组织中CYP2E1的活 性,对照组注射生理盐水.体外实验则提取肝微粒体蛋白与AN在一定条件下 共孵育:分为空白对照组,单纯AN孵育组和AN+NADPH共孵育组,研究不 同浓度AN(0以、5耀倌、10 ktg/g、25 Pg/g、50 Hg/g、75 l上g/g)以及不同孵育时 间(O min、5 min、10 min、20 min、40 min、60 min)CYP2E1酶活性的变化趋 势,探讨AN原型分子在CYP2E1酶活性变化中的作用.体内染毒的剂量以大鼠 体重计算具体染毒剂量,而体外实验的浓度计算则根据微粒体蛋白含量来调 节. 结果(1)所有AN染毒后大鼠均出现不同程度的流泪、流涎、耳廓发红,个 别大鼠出现腹泻,鼻孔渗血等胆碱能毒性症状;

75 mg/kg剂量组部分大鼠出现抽 搐、口唇发紫、后肢无力、呼吸急促、翻正反射消失症状. 丙烯腈急性染毒对大鼠肝脏细胞色素P450 2El酶活性影响的研究 (2)肝脏中CN'

检测结果显示,随着AN染毒时间的增加,CN'

含量呈先升高 后降低的趋势,并且染毒剂量越高,其升高越明显.而单纯KCN染毒后15 rain 至6 h各观察点,肝脏中CN.含量未见明显变化. (3)CeOx活性检测结果显示,随着染毒时间的增加,三个染毒剂量组的CcOx 活性都呈现先降低后逐渐恢复的趋势,并且在染毒3 h后各剂量组恢复至对照组 水平. (4)CYP2E1酶活性检测结果显示,三个AN染毒组的CYP2E1酶活性呈先降 低后升高趋势,随着染毒剂量的增加,其下降速度越快,并在3 h至12 h时活性 持续维持在对照组的30%左右.单纯氰化钾(KCN)染毒组1

5 min至6 h各观察 点CYP2E1活性未见明显变化. (5)CYP2E1蛋白含量检测结果显示,25 mg/kg染毒组CYP2E1蛋白表达略低 于正常对照组,50 mg/kg和75 mg/kg染毒组CYP2E1蛋白表达都呈现先升高后 降低的趋势,随着染毒剂量的增加其表达增长的越快,并在l h时达到最高水平,

24 h恢复到正常水平. (6)体外实验结果显示,单纯AN与微粒体孵育可明显抑制CYP2E1酶活性, 具有剂量.时间.效应,即随着剂量增加或孵育时间的延长,CYP2E1活性下降幅 度增加,在体外孵育lh时其活性仅为孵育前(O min)时的30%左右,但当AN与NADPH共孵育后,CYP2E1酶活性变化不明显. 结论AN急性染毒可抑制大鼠肝脏CYP2E1酶的活性,但却增加CYP2E1 蛋白含量,但其主要代谢产物CN'

却没有类似效应;

体外研究结果也进一步提 示了AN原型在CYP2E1活性变化中的作用.因而急性AN接触对CYP2E1的影 响值得进一步研究,以明确其在化学物混合接触效应中的意义. 关键词: 丙烯腈;

CYP2E1;

急性中毒;

肝脏 II 江苏大学硕士学位论文 ABSTRACT Objective Cytochrome P450 2E l(CYP2E1)is one of subtypes of Cytochrome P450 (Cytochrome P450,cvP),which is mainly expressed in liver.CYP2E1 plays a key role in inactivation or activation of the substrates,which has raised much more concerns in the fields of pharmacology and toxicology.CYP2E1 is considered to be an important determinant of environmental,industrial toxicants and carcinogens. Some studies have shown that CYP2E

1 could be regulated by its substrates,such as insulin and ethan01.Acrylonitrile(朋叼which is an important chemical intermediate is one of substrates of CYP2E I.However,there are few reports about the influence of AN on CYP2E 1.Due to key roles of CYP2E1 in drug-drug and drug―chemical interactions,this study was designed to explore acute effects of AN treatment on CYP2E