PDF《中华人民共和国国家标准》

3 .

2 .

1 .

1 储存液 姬姆萨粉末 . .

5 9 甘油( 中性)

2 5 mL 甲醇

2 5 mL 将姬姆萨粉于研钵内, 先加少许甘油研磨, 至甘油加完为止, 倒人棕色试剂瓶中, 再用少量甲醇加人 研钵内, 逐渐将甘油洗下, 倒人试剂瓶内, 直至用甲醇洗净研钵体内甘油为止.并将剩余甲醇一并加人 瓶中, 塞紧瓶盖, 充分摇匀, 置600C温箱内2

4 h 或室温一周后即可使用.

3 .

2 .

1 .

2 应用液 使用前储存液用 p H7 .

2 -7 .

4 P B S

1 0 倍稀释即成.

3 .

2 .

2 染色法 涂片或压印片风干后用甲醇固定

5 mi n后滴加姬姆萨应用液, 染色2

0 -3

0 m i n , 用流水冲洗, 甩干, 风干或滤纸吸干后镜检.

3 .

2 .

3 结果 使用油镜放大

1 0

0 0 倍观察 , 组织、 脓汁或红细胞呈红色, 细菌呈紫色.

3 .

3 英膜染色法

3 .

3 .

1 染色液 甲醛中加人

2 %印度黑汁;

革兰染色液中的沙黄复染液.

3 .

3 .

2 染色法

3 .

3 .

2 .

1 取一接种环肉汤培养物于载玻片上, 再取一接种环甲醛印度黑汁与其混匀, 推成薄片, 自然干 燥后火焰固定.

3 .

3 .

2 .

2 滴加沙黄复染液, 染色3

0 s , 吸去多余液体, 干燥后油镜观察.

3 .

3 .

3 结果使用油镜放大

1 0

0 0 倍观察, 细菌周围有透明带者为英膜染色阳性.

3 .

4 支原体菌落染色法

3 .

4 .

1 染色液( D i e n e s 染色液) 美兰

2 .

59 刃天青( a z u r e )

1 .

2 5 g 麦芽糖

1 0 .

0 g 苯甲 酸..29蒸馏水

1 0

0 mL

3 .

4 .

2 染色方法 临用前将染色液用蒸馏水稀释

1 0

0 ^ -

3 0

0 倍, 滴加到疑似有支原体菌落的平皿中, 使其铺满个平皿, 不断摇动,

1 5 mi n后倒掉染色液, 用pH7 .

4 P B S 洗3次.

3 .

4 .

3 结果 平皿置解剖镜或低倍镜下观察, 支原体菌落呈蓝色, L型细菌菌落在短时间内能染上蓝色, 但30-60min后褪色, 呈无色. GB / T

1 4

9 2

6 .

4 3 -

2 0

01 3 .

5 乳酸酚棉蓝染色液

3 .

5 .

1 染色液 结晶酚

2 0 g 乳酸

2 0 mL 甘油

4 0 mL 蒸馏水

2 0 mL 棉蓝

0 .

0 5 g 除棉蓝外, 其余成分混匀后水浴加热, 充分搅拌直至完全溶解, 然后加人棉蓝, 混合均匀, 必要时过 滤, 瓶装备用

3 .

5 .

2 染色方法: 取载玻片并加染色液数滴, 用接种针( 环) 取培养物置于染色液中, 然后加盖玻片, 静置10mi n 后, 吸去周围染液, 用高倍镜检查.

3 .

5 .

3 结果: 真菌菌体呈蓝色.

3 .

6 鞭毛染色液

3 .

6 .

1 染色液

3 .

6 .

1 .

1 甲液: 单宁酸5 g , 氯化高铁( ( F e C l , )

1 .

5 g 溶于1

0 0 m L 蒸馏水中, 待溶解后加人1 %的氢氧化 钠溶液

1 mL和15%的甲醛溶液

2 mL .

3 .

6 .

1 .

2 乙液 :

2 g硝酸银溶于

1 0

0 mL蒸馏水中. 在90mL乙液中滴加浓氢氧化按溶液, 到出现沉淀后, 再滴加使其变为澄清, 然后用其余

1 0 m L乙 液小心滴加至澄清液中, 至出现轻微雾状为止, ( 此为关键性操作, 应特别小心) , 滴加氢氧化按和用剩余 乙液回滴时, 要边滴边充分摇荡, 染液当天配, 当天使用.

3 .

6 .

2 染色法 : 在风干的载玻片上滴加甲液

4 -6 mL后, 用蒸馏水轻轻冲净.再加乙液, 缓缓加热至 冒气, 维持约3

0 s ( 加热时注意勿使出现干燥面) , 在菌体多的部位可呈深褐色到黑色, 停止加热, 用水冲 净, 烘干镜检.