PDF《简明中文手册》

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3 &

5 实时定量 PCR 仪 简明中文手册 第三部分:基因分型 (Software v1.

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2 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪Applied Biosystems? QuantStudio?

3 & 5实时定量PCR仪1. 双击桌面图标 ,开启QuantStudio Design & Analysis Software,或从开始菜 单>All Programs > Applied Biosystems > QuantStudio Design & Analysis Software> QuantStudio Design & Analysis Software开启软件. 2. 进入主界面后,点击"Create New Experiment" . 3. 在"Properties"界面设置实验属性: a. 输入实验的名称;

b. 选择仪器型号;

c. 选择仪器的 Block(加热模块)类型;

d. 选择实验类型为"Genotyping";

e. 选择实验试剂类型为"TaqMan Reagents";

f. 选择运行模式(Run mode)为"Standard". 4. 点击"Next "进入"Method"界面,设置实验的运行程序. a. 勾选"Pre-PCR Read"和"Amplification";

b. 输入 PCR 反应体积;

简明中文操作指南

3 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪c. 单击更改 PCR 反应的温度和时间;

d. 更改反应循环次数;

e. 确认相机图标为亮蓝色状态,以保证信号被采集;

4.1 (可选)设置多梯度反应温度:①单击 (Advanced Settings) ;

②勾选 VeriFlex,③然后更改Block上相应区域的反应温度,相邻区域温度差异不能超过 5℃ . 注:梯度反应温度设置仅限于96孔加热模块.QuantStudio

3 可设置3个梯度反应 温度;

上图为QuantStudio 5示例图,可设置6个梯度反应温度. 简明中文操作指南

4 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪4.2 (可选)设置暂停程序:点击① 图标,②勾选Pause,③设置暂停前的反应循环 数(Pause after cycles) ,以及暂停后的温度(Pausing Temperature,范围: 4~99.9℃) . 5. 进入 Plate 界面,点击"Advanced Setup",编辑 SNP 信息、样本名称和样品板 信息. 5.1 编辑SNP Assay信息: 5.1.1 选中需要编辑的SNP,在"SNPs"内单击"Action" ,选择"Edit"进入SNP assay 编辑界面. 简明中文操作指南

5 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪5.1.2 在a"SNP Assay Name" 中填写待测SNP位点名称;

在b"Allele1/Allele2 Name"中输入待测位点的碱基名称;

在c"Reporter"和"Quencher"中选择所 标记的荧光基团及淬灭基团.对于"Quencher"的选择,如果是MGB探针,请选 择"NFQ-MGB" ;

如果是TAMRA探针,请选择TAMRA;

如果是其他形式的无荧光 淬灭基团,请选择"None" .设置完成后点击"OK" . 5.2 单击"Sample Name"编辑样品名称,点击"Add"添加待测样品. 5.3 编辑样品板: 利用鼠标单选或拖拽以选择反应孔,然后勾选左侧的对应的SNPs及样本,同时在 "Task"选项中设定该反应孔的类型(U代表未知样本,N代表阴性对照, 、 、 分别代表三种基因型的阳性对照) . 简明中文操作指南

6 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪6. 点击"Next "进入"Run"界面,点击"Save"保存文件,然后点击"START RUN"开始运行. 7. 实验运行结束后,进入"Results"界面,点击右上角的"Analyze"按钮分析数据 并查看结果. 7.1 查看分型结果:选择"Allelic Discrimination Plot"查看基因分型图.点击 a , 在"SNP Assay"中可查看其他 SNP 的基因分型图. 简明中文操作指南

7 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪7.2 查看"QC Summary"结果:反应孔可能存在异常情况时,会出现黄色三角提示, 数字

1 代表有一种情况,2 代表有两种情况,以此类推.详细信息及解决方案可以 在"Flag Details"中查看. 8. 数据导出:在"Export"界面下根据需要导出数据. 简明中文操作指南

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