PDF《北京博奥晶典生物技术有限公司》

比较Celsee 与Cellsearch 系统对 CTCs 的捕获效果;

4.基于 CelSee 平台从其 他体液中分离稀有细胞 样本采集:10 例恶性肿瘤 IV 期患者血液样本 15ml;

癌旁 组织、癌组织原发病灶、癌组 织转移病灶样本;

DNA 提取:取患者血样各 7.5ml 分别提取 ctDNA 及富 集和回收 CTCs;

提取癌旁组 织、癌组织原发病灶、癌组织 转移病灶样本 DNA 样本;

高通量测序和变异检测: 提取 的DNA 样本进行高通量测 序, 分析 SNP, CNV 等变异检 测;

对获得的 CTCs 细胞进行 测序变异检测;

比较不同部位肿瘤样本基因 变异差异;

样本采集:30 例恶性肿瘤 IV 期患者经手术、 化疗或放疗后 不同时间点外周血, 每个时间 点各 5ml;

CTCs 富集和计数: 在Celsee 系统进行 CTCs 富集,上样量 4ml/样本;

对捕获到的 CTCs 细胞进行计数;

分析 CTC 数量与治疗效果之 间的相关性;

样本采集:10 例泌尿系统恶 性肿瘤 IV 期患者尿液和

10 名健康孕妇外周血, 每个样本 10ml;

稀有细胞富集和计数:在Celsee 系统进行稀有细胞富 集,上样量 2-8ml/样本;

对 捕获到的稀有细胞进行计数;

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四、 实验方案

(一)Celsee 与CellSearch 系统 CTC 捕获效果对比 1)实验目的: 比较 Celsee 与CellSearch 系统的 CTC 富集分离效果. 2)样品需求:

20 例恶性肿瘤(首选乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌和肺癌)IV 期患者外周血样品,5 例正常 人外周血样品作对照, 每人采集

15 ml 外周血, 使用博奥晶典提供 cellsave 采血管进行采血. 3)样品保存和运输: 样品室温(20-25℃)保存,采血后 48h 内送至博奥晶典实验室和 CellSearch 平台所在实验 室. 4)实验方法: 每个样品取 7.5ml 血液用 Celsee PREP

400 系统进行分离富集;

另外 7.5ml 血液用 CellSearch 系统进行分离富集;

分离完成后对比分离富集效果,进行敏感性、特异性、免疫荧光分析.

(二)不同部位肿瘤基因变异分析 1)实验目的: 提取不同部位肿瘤组织及血液样本检测不同部位肿瘤基因变异情况, 采集血液样本分离富集回 收CTC 进行单细胞测序测试细胞回收情况及回收细胞是否能达到测序要求. 2)样品需求:

10 例恶性肿瘤(首选乳腺癌、肺癌)IV 期患者的癌旁正常组织、癌组织原发病灶、癌组织转 移病灶和

15 ml 血液外周血样品;

3)样品保存和运输: a)血液样品室温保存,采血后 48h 内送至博奥晶典实验室;

b)组织样品-80℃保存,干冰运输至博奥晶典实验室

6 4)实验方法: a)提取癌旁正常组织、 癌组织原发病灶、 癌组织转移病灶的 DNA 以及 7.5ml 血液中 ctDNA, 进行高通量测序,比较 SNP、CNV 等变异情况;

b)另外 7.5ml 血液进行 CTC 分离富集,回收细胞后进行单细胞测序,比较 SNP、CNV 等变 异情况.

(三)肿瘤患者不同时期 CTCs 计数分析 1)实验目的: 测试利用 Celsee 平台检测的 CTC 数量与治疗效果之间的关系. 2)样品需求:

30 例恶性肿瘤(首选乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌)IV 期患者经手术、化疗或放疗后不 同时间点外周血,每个时间点各 5ml. 3)样品保存和运输: 样品室温保存,血液样品需在采集后

48 小时内送至博奥晶典实验室. 4)实验方法: 对手术、化放疗后各时间点患者外周血进行分离富集 CTC 计数,统计分析 CTC 数量与治疗效 果之间的相关性.

(四)基于 CelSee 平台从其他体液中分离稀有细胞 1)实验目的: 测试利用 Celsee 平台从体液中分离稀有细胞: (1)利用 Celsee 平台分离富集尿液中的肿瘤细胞;