PDF《《食品化学与分析》》

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3、计算

100 * w v 水分(%)= 式中 v-刻度管中水层的容量(ml) W-样品的重量(g) 实验三 色层分离实验 【实验目的】 用柱层析和薄层层析法从番茄中提取番茄红素和β―胡萝卜素. 【实验原理】 类胡萝卜素为多烯类色素,不溶于水而溶于脂溶性有机溶剂.本实验先用乙醇将番茄 中的水脱去,再用二氯甲烷萃取类胡萝卜素.因为二氯甲烷不与水混溶,故只有除去水 分后才能有效地从组织中萃取出类胡萝卜素.根据番茄红素与β-胡萝卜素极性的差别, 用柱层析可以将它们分离.分离效果可以用薄层层析进行检验. 【实验步骤】

1、实验材料和试剂 (1) 新鲜番茄(或番茄酱). (2) 95%乙醇;

二氯甲烷;

石油醚(60~90℃);

氯仿;

中性或酸性氧化铝(柱层析用);

环已烷;

硅胶 G;

饱和氯化钠溶液;

无水硫酸钠.

1、 操作方法 (1)原料处理与色素提取 称取新鲜番茄浆 20g 于100ml 圆底烧瓶中,加95%乙醇 40ml,摇匀,装上回流冷凝管,在水浴 上加热回流

5 分钟,趁热抽滤,滤液备用.向圆底烧瓶内,加入 30ml 二氯甲烷,水浴上加热回流

5 分钟,冷却,滤液备用,向圆底烧瓶内,再加 10ml 二氯甲烷重复萃取一次.合并乙醇和两次二氯甲 烷提取液,倒入分液漏斗中,加5ml 饱和氯化钠溶液(有利分层),振摇,静置分层.分出橙黄色 有机相,使其流经一个在颈部塞有疏松棉花且在棉花上铺一层 1cm 厚的无水硫酸钠的三角漏斗,以 除去微量水份.将此溶液储存于干燥的有塞子的锥形瓶中.层析之前,将此溶液在通风橱中用热水 浴蒸发至干. (2)柱层析分离 取一支长 15cm 左右内径为 1~1.2cm 的层析柱,柱内装有用石油醚调制的氧化铝.将粗制的类 胡萝卜素溶解于 4ml 苯中,用滴管在氧化铝表面附近沿柱壁缓缓加入柱中(留1-2 滴供以后的薄层 层析用),打开活塞,至有色物料在柱顶刚流干时即关闭活塞.用滴管取几毫升石油醚,沿柱壁洗 下色素,并通过放出溶剂至柱顶刚流干,从而使色素吸附在柱上.然后加大量的石油醚洗脱.黄色 的β-胡萝卜素在柱中移动较快,红色的番茄红素移动较慢.收集洗脱液至黄色的β-胡萝卜素从柱 上完全除去,然后用极性较大的氯仿作洗脱剂洗脱番茄红素(注意更换接收瓶).将收集到的两个 部分在通风橱内用热水浴蒸发至干.将样品分别溶于尽可能少的二氯甲烷中,尽快进行薄层层析. (3)薄层层析检验 在用硅胶G铺成的薄板上距离底边约 1cm处,分别用毛细管点上三个样品,中间点为未分离的混 合物,两边分别点上分离得到的β-胡萝卜素和番茄红素.可以多次点样,即点完一次,待溶剂挥发 后再在原来的位置上点样.但要注意,必须在同一位置上点,而且样品斑点尽量小.点样时毛细管 只要轻轻接触板面即可,切不可划破硅胶层.样品之间的距离为 1-1.5cm.将此板放入装有环已烷 作展开剂的层析缸中,盖上盖子.切勿让展开剂浸没样品斑点.待溶剂展开至 10cm左右时,取出层 析板.因斑点会氧化而迅速消失,故要用铅笔立即圈出.计算不同样品的Rf值,比较不同样品Rf值大 小的原因以及分离效果.

4 溶质最高浓度中心至原点中心的距离 Rf= 溶剂前沿至原点中心的距离 (4)注意

1、 新鲜番茄浆的制备:将新鲜番茄洗净,用捣碎机捣碎或用市售的番茄酱.

2、 氧化铝层析柱的装填方法:将层析柱垂直固定于铁架上,铺上一层薄薄的石英砂,关闭活 塞.称取 15g 氧化铝置于 50ml 锥形瓶中,加入 15ml 石油醚(顺序不能反)边加边搅,且不断旋摇 直至成均匀浆液(稠厚但能流动),向柱内加入溶剂(石油醚)至半满,然后开启活塞让溶剂以每 秒一滴的速度流入小锥形瓶中,摇动浆液,不断地逐渐倾入正在流出溶剂的柱子中,不断用木棒或 带橡皮管的玻璃棒轻轻敲击柱身,使顶部成水面,将收集到的溶剂在柱内反复循环几次,以保证沉 降完全和装紧柱.整个过程不能让柱流干.待溶剂刚好放至柱顶刚变干时即可上样.