编辑: huangshuowei01 | 2013-03-19 |
10.14 TOPIC 目录
01 Introduction
02 Materials and methods
03 Results and discussion
01 Introduction
1 . Introduction 益生菌(Probiotics)是一类对宿主有益的活性微生物,是定植于人 体肠道、生殖系统内,能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、 发挥对肠道有益作用的活性有益微生物的总称.人体、动物体内有益 的细菌或真菌主要有:酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、 放线菌、酵母菌等.? 益生元(Prebiotics)是这样一种物质:它是一种膳食补充剂, 通过选择性的刺激一种或少数种菌 落中的细菌的生长与活性而对寄主产生有益的影响从而改善寄主健康的不可被消化的食品成分 (Gibson and Roberfroid,1995).成功的益生元应是在通过上消化道时,大部分不被消化而能被肠 道菌群所发酵的.最重要的是它只是刺激有益菌群的生长,而不是有潜在致病性或腐败活性的有 害细菌.
1 . Introduction 鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus),从属于乳杆菌属,是人体正常菌群之一,肠道黏着 率高,定植能力强,并具有高效降胆固醇,促进细胞分裂,可起到调节肠道菌群、预防 和治疗腹泻、提高机体免疫力功能.水产中已被广泛应用控制嗜水气单胞菌和黄杆菌引 起的虹鳟中的感染和爱德华氏菌和链球菌引起的罗非鱼的感染.
1 . Introduction 乳酸乳球菌( Lactococcus lactis,L. lactis)是一种原核微生物,归属于硬壁菌门, 杆菌纲,乳杆菌目,链球菌科,乳球菌属,同时是乳酸菌属中的一种重要模式菌. 乳酸乳球菌 JCM5805 被发现是一种可以直接激活 小鼠和人类中独特的 pDCs(浆细胞,树状细胞).口服 JCM5805 也已显示通过可以 pDC 增强 NK 细胞的细胞毒 活性.pDC 可以表达 TLR-7 和TLR-9 两种不同的类型 Toll样受体,以MyD88 依赖性方式诱导I型IFN 的产生.
1 . Introduction 无乳链球菌(S.agalactiae)是乳腺炎的病原体,常存在于乳牛的皮肤、乳头及乳房内,通 过挤乳人员的手或挤乳机械以及蝇类的机械携带而传播.这种链球菌引起乳房炎后不产 生明显免疫力,目前尚无可靠的多价菌苗. 鼠李糖 杆菌 乳酸乳 球菌 无乳链 球菌
02 Materials and methods
2 . Materials and methods
2 . Materials and methods 乳酸菌(LAB)菌株均购自日本微生物保藏中心(JCM), 在30℃下培养48小时,收集,5000g离心5分钟.无菌蒸馏水 洗涤两次,冷冻干燥并悬浮于PBS中.细菌数量通过比浊法 测定. 基础日粮的配方如图1,制备三种补充饮食(图2).加 入适当的LAB将饲料原料混合制粒.每天都会生产新批次的 饲料储存在4°C的密封塑料袋中,以维持LR和LL的活力.
2 . Materials and methods 养殖对象:尼罗罗非鱼幼鱼(0.20±0.05g) 养殖时间:根据以往养殖情况养殖5周,但由于益生菌组与对照组之间生长 性能没有显著性差异,所以养殖时间延长一周.在第7周,所有鱼都喂食基础 日粮. 养殖条件:在28-29°C水中暂养一周.然后将体格 健壮的鱼被随机分配到十二个玻璃缸(每个缸六十条 鱼,每个处理三个重复)中.为了尽量减少外部环境 的影响,水和饲料预先用紫外线灭菌.
2 . Materials and methods 取样: 6周后,禁食24小时,用过量MS-222麻醉处死. 轻轻剪取鱼的一段中肠(约1厘米),在PBS(pH7.2)中洗涤3次,每次1分钟以除去消化物, 用于肠粘膜形态学观察. 中肠的其余部分以相同方式洗涤并用于RT-PCR分析. 另取实验鱼的无菌条件下打开腹腔,取出肠道并在无菌磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)中轻 轻洗涤3次,每次1分钟以除去内容物和非粘附细菌,用于细菌群落分析. 称量鱼重以计算体重增加率(WG),饲料转化率(FCR).