PDF《Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel》

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网址:www.yeasen.com 第1页,共3页HB190530 Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel Anti-Flag 亲和纯化凝胶 产品信息 产品名称 产品编号 规格 Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel(Anti-Flag 亲和纯化凝胶) 20585ES01

100 μL Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel(Anti-Flag 亲和纯化凝胶) 20585ES03

1 mL Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel(Anti-Flag 亲和纯化凝胶) 20585ES08

5 mL Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel(Anti-Flag 亲和纯化凝胶) 20585ES25

25 mL Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel(Anti-Flag 亲和纯化凝胶) 20585ES60

100 mL 产品描述 Anti-Flag 亲和纯化凝胶(Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel)由高质量的鼠源 IgG2b 单克隆抗体与 Sepharose 4B gel 通过供价偶联制备, 本产品具有较高的 Flag 标签融合蛋白加载容量 (至少为 1.1 mg protein/mL 凝胶) , 杂蛋白非特异结合少, 可用于带有 Flag 标签的融合蛋白免疫沉淀(IP)和纯化. Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel (Anti-Flag亲和纯化凝胶) 可结合Met修饰的 N端Flag融合蛋白 (Met-FLAGCProtein) , N 端Flag 融合蛋白(FLAGCProtein) ,C 端Flag 融合蛋白(Protein-FLAG) . 产品性质 运输和保存方法 冰袋运输.未开封的产品在-20℃下可稳定保存

1 年.禁止在不含甘油的溶液中冻存! 注意事项 1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作. 克隆号(Clone) 1E6 亚型(Isotype) Mouse IgG2b 纯化方法(Purity) Protein A 抗体浓度(Antibody Concentration) 7.5 g 抗体/L 凝胶 应用(Application) 蛋白纯化, 免疫沉淀(IP) 蛋白结合量(Protein) ≥1.1 mg 蛋白/mL 凝胶 储存缓冲液(Buffer) 10mM Na3PO4,150mM NaCl,50%甘油,pH7.4,含有 0.02%(w/v)叠氮钠 上海翊圣生物科技有限公司 客服热线:400-6111-883 E-mail: [email protected]

网址:www.yeasen.com 第2页,共3页使用方法

一、制备细胞裂解液(以哺乳动物细胞为例) 注意:样品中不能含有颗粒不溶物,可以用 0.22 μm 滤膜过滤或 10,000*g 离心

15 min;

如有必要,可以加入蛋白酶抑制剂;

如样品太粘稠,可以加入核酸酶处理. 细胞密度 70-90%,100 mm 培养皿 (约106 -107 细胞) , 加入 1mL 裂解液 (50 mM Tris-HCl, pH 7.4,150 mM NaCl,

1 mM EDTA,1%Triton X-100) .推荐加入蛋白酶抑制剂 Cocktail(Cat 20123ES) . 1)清洗细胞 贴壁细胞:去除生长培养基,用PBS 洗2次,去除 PBS,加入裂解液(106 -107 cells/mL) . 悬浮细胞:细胞转移到离心管中,420* g 离心

5 min,去除上清.用PBS 重悬,420*g 离心

5 min,重复

1 次,去除上清, 加入裂解液重悬(106 -107 cells/mL) . 2)加入裂解液后,孵育 15-30 min. 3)离心,12,000*g,10 min. 【贴壁细胞离心前先把细胞刮下来】 4)收集上清到预冷的样品管中.上清可储存在-70℃.

二、应用 可以使用层析柱或免疫沉淀(IP)纯化目的蛋白.1-3 mL 凝胶层析柱可以纯化约

100 mL 细胞裂解液;

如样品体积较小 (1-2 mL 细胞裂解液) ,可以使用免疫沉淀(IP)法;

如需处理较大体积细胞裂解液,推荐使用溶液体系.

1 层析柱法 1.1 装柱 1)准备层析空柱(Cat 20520ES-20526ES) ;

用2-3 倍柱体积的 TBS(50 mM Tris-HCl,pH 7.4,150 mM NaCl)或其他适合 缓冲液洗柱

2 次. 2)颠倒混匀 Anti-Flag 亲和纯化凝胶,保证凝胶均一.取1-3 mL 凝胶装柱(纯化约

100 mL 细胞裂解液) . 3) 用2-3 倍柱体积的 TBS 洗2次, 待液体流尽后, 用3倍体积的 0.1 M Gly-HCl, pH 3.5 冲洗, 要保证凝胶平面平整. Gly-HCl 缓冲液处理时间不要超过