PDF《上海歌凡生物科技有限公司》

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56529970 Exosome 分离纯化试剂盒 货号:EX010 原理与方法: Exosome 分离纯化试剂盒是上海歌凡生物研发的针对细胞培养上清液、 尿液、 脑脊液、 羊水等体液样品分离纯化 exosome 的试剂盒.用此试剂盒能高效获取此体液中高纯度的 exosome,并可用于 exosome 后续细胞功能、RNA 和蛋白质的研究. 试剂盒组成: 产品编号 产品名称 包装 EX010 exosome 分离纯化液 10ml 保存条件: 4℃保存. 血清样品收集 用采血针和普通血清管(不含任何试剂,10ml 规格)采血 10ml.室温静置 30mln,然后4℃条件下,静置 3-4 小时(此时可见血快析出) .用移液器吸取上面的淡黄色血清(应 该有 4ml 左右)转入 15ml 离心管中,4℃条件下 3000g 离心 15min,小心取上清转入 15ml 离心管中,最大程度保证血清质量.离心后的血清

15 分钟内冻存于-80℃冰箱. 血浆样品(不能用肝素抗凝)收集

1、 用采血针和 EDTA 抗凝管抽取全血,轻柔混匀后室温或者 4℃保存,并在

1 小时内进行 下一步处理.

2、 4℃条件下,使用吊桶式转头 1900g 离心 10min,小心吸取上清即为血浆,最后 500ul 左右丢弃.得到的血浆再次离心,条件为 4℃,3000g,15min,小心吸取血浆,注意不 要碰到底部和侧面的沉淀物.

3、 将血浆冻存于-80℃.提示:送样最好 4ml 以上(分离 4ml 血浆约需要 8-10ml 全血) . 血清血浆样本收集注意事项: 1. 空腹采血;

2. 病人采血时要对病人的姓名、年龄、身高、体重、血糖、血脂做记录,对血脂特别高或 者血糖特别高的标本要做特殊标记;

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56529970 3. 剔除有溶血的标本;

4. 样本标记要简单清晰;

5. 取好的血清血浆标本要用封口膜封口后放-80℃冻存,避免反复冻融! Exosome 分离纯化步骤

1、 取出血清或血浆样本,恢复到室温,并4℃3000gx20min 离心,取上清,去除大分子蛋 白及组织碎片;

2、 0.22um 滤器过滤;

3、 取1ml 样品转移至一个无菌的新的 EP 管中,加入 exosome 分离纯化溶液 0.2ml,用移 液枪充分混匀,4℃混匀过夜或>14 小时;

4、 1500gx30min,4℃离心;

5、 吸除上清液后,再1500gX5min,4℃离心,去除残余溶液;

6、 加50ul 无菌 PBS 或去离子水重悬混匀 exosome 沉淀;

7、 重悬 exosome,4℃可短期保存,-20℃可长期保存;

结果与观察 Exosome 为半托杯状结构,粒径范围多在 20-200nm. 注意事项:

1、 本试剂可室温保存,4℃保存也可.

2、 本品仅限用于科研实验.

3、 做少量 WB 实验一般 1ml 细胞培养上清液或尿液样本基本足够,但为了足量分离 exosome 做rna 或蛋白质分析,我们推荐使用大于 10ml 样本量来分离 exosome.

4、 分离 exosome 可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol 或蛋白裂解液 抽提 RNA 或蛋白质或 1:100PBS 稀释行粒径检测;

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56529970 TEM(120kv 生物透射电镜)