PDF《不同电转仪的电转参数、质粒用量和拓扑结构对》

Hereditas (Beijing)

2017 年10 月, 39(10): 930D938 www.

chinagene.cn 技术与方法 收稿日期: 2017?03?06;

修回日期: 2017?04?07 基金项目: 国家转基因重大专项(编号:2016ZX08006002)课题,广东省科技厅平台条件建设项目(编号:2013B070702003)和粤西 扬帆计划 博士后人才扶持基金资助项目(2016)资助[Supported by the National Transgenic Major Project (No. 2016ZX08006002), Department of Science and Technology of Guangdong Province (No. 2013B070702003) and Yuexi Flying Sail Program Postdoctoral Foundation(2016)] 作者简介: 钟翠丽,硕士研究生,专业方向:动物遗传育种与繁殖.E-mail: [email protected] 通讯作者: 张献伟,博士,在站博士后,研究方向:动物遗传育种与繁殖.E-mail: [email protected] DOI: 10.16288/j.yczz.17-080 网络出版时间: 2017/9/14 9:11:30 URI: http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1913.R.20170914.0911.002.html 不同电转仪的电转参数、质粒用量和拓扑结构对 猪胎儿成纤维细胞转染效率的影响 钟翠丽

1 ,李国玲

1 ,莫健新

1 ,全绒

1 ,王豪强

1 ,李紫聪

1 ,吴珍芳 1,2 , 张献伟 1,2 1. 华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心,广州 510642;

2. 广东温氏食品集团股份有限公司,新兴

527400 摘要: 为获得猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts, PFFs)最佳的电转染效率, 本研究利用荧光激活细胞分 选技术(fluorescence activated cell sorting, FACS)辅助优化 NEPA

21 和Nucleofector? 2b 两种电转仪电转染 PFFs 细胞的参数,比较不同质粒用量和拓扑结构在 ECM?

830、NEPA

21 和Nucleofector? 2b 中的转染效率.结果 显示:NEPA

21 电转 PFFs 的最佳穿孔参数为脉冲电压

200 V,脉冲长度

3 ms,脉冲间隔

50 ms,脉冲次数

3 次,脉冲电压衰减幅度 10%;

Nucleofector? 2b 在U-023 的转染参数下达到最高转染效率.ECM?

830 和Nucleofector? 2b 的最适质粒用量都为

10 μg, 而NEPA

21 为8μg;

超螺旋质粒比线性化质粒的转染效率更高, 且3种仪器中 Nucleofector? 2b 转染效果最佳.本研究综合考虑电转仪、电转参数、质粒用量和拓扑结构的影 响因素以优化 PFFs 的电转条件,为高效制备转基因猪及基因编辑猪的研究奠定基础. 关键词: 电转染;

猪胎儿成纤维细胞;

ECM? 830;

NEPA 21;

Nucleofector? 2b Effects of parameters, plasmid dosages and topological struc- tures on transfection efficiency of porcine fetal fibroblasts using different electroporators Cuili Zhong1 , Guoling Li1 , Jianxin Mo1 , Rong Quan1 , Haoqiang Wang1 , Zicong Li1 , Zhenfang Wu1,2 , Xianwei Zhang1,2 1. National Engineering Research Center for Breeding Swine Industry, South China Agricultural University, Guanzhou 510642, China;

2. Guangdong Food Group Limited Company, Xinxing 527400, China Abstract: To obtain an ideal transfection efficiency of porcine fetal fibroblasts, fluorescence activated cell sorting (FACS) was used to optimize parameters for transfection of porcine fetal fibroblasts (PFFs) with ECM? 830, NEPA 第10 期 钟翠丽等: 不同电转仪的电转参数、质粒用量和拓扑结构对猪胎儿成纤维细胞转染效率的影响

931 21 and Nucleofector? 2b in different conditions such as electroporation parameters, plasmid dosages and topological structures. The results show that the optimum poring pulse parameter of NEPA

21 is voltage

200 V, continuous

3 ms, interval

50 ms,

3 times, voltage attenuation range of 10%;

and the transfection efficiency of Nucleofector? 2b is highest under U-023 program. Under the optimum conditions, FACS analysis demonstrates that Nucleofector? 2b and ECM?