PDF《AxyPrep 无内毒素质粒小量试剂盒》

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1 爱思进生物技术(杭州)有限公司

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1 AxyPrep 无内毒素质粒小量试剂盒 本试剂盒采用 SDS 碱裂解法,结合 DNA 制备膜选择性吸附 DNA.同时采用特殊溶液(Buffer ETR 和Buffer PF)有效去除内毒素,可从 1-4ml 细菌培养物中提取出多至

20 ?g 高纯度质粒 DNA,其内毒素水平控 制在 0.1 EU/?g 以下.

一、试剂盒组成、贮存、稳定性 Cat. No. AP-MN-EP-4 AP-MN-EP-50 AP-MN-EP-150 制备次数

4 preps

50 preps

150 preps 制备管

4 50

150 2 ml 离心管

4 50

150 1.5 ml 离心管

8 100

300 RNase A

10 ?l

30 ?l

90 ?l Buffer S1

2 ml

15 ml

45 ml Buffer S2

2 ml

15 ml

45 ml Buffer S3 2.5 ml

21 ml

63 ml Buffer W1 2.8 ml

30 ml

96 ml Buffer W2 concentrate 2.4 ml

24 ml

72 ml ET-free water (70% ethanol) 1.5 ml

18 ml

54 ml Eluent A 1.0 ml

12 ml

36 ml Buffer ETR 0.9 ml

9 ml

27 ml Buffer PF 0.2 ml 2.5 ml 7.5 ml 说明书

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1 RNase A:50 mg/ml,室温可贮存

6 个月,长期贮存于-20 ℃. Buffer S1:细菌悬浮液.加入 RNase A 后,混合均匀,4℃贮存. Buffer S2:细菌裂解液(含SDS/NaOH) ,室温密闭贮存. Buffer S3:中和液,室温密闭贮存. Buffer W1:洗涤液,室温密闭贮存. Buffer W2 concentrate:去盐液.使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(可用 100%乙醇或 95%乙醇) .混合均匀,室温密闭贮存. ET-free water (70% ethanol):使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(可用 100%乙醇或 95% 乙醇) .混合均匀,室温密闭贮存. Eluent A :洗脱液.室温密闭贮存. Buffer ETR:内毒素去除液.室温密闭贮存. Buffer PF:分相缓冲液.室温密闭贮存. 11/05 Ver.1 爱思进生物技术(杭州)有限公司

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二、注意事项 Buffer S

2、Buffer S3 和Buffer W1 含刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套和防护眼镜,避免沾染皮 肤、眼睛和衣物,谨防吸入口鼻.若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或生理盐水冲洗,必要时寻求 医疗咨询.

三、实验准备 1. 第一次使用前,RNase A 全部加入 Buffer S1 中,4 ℃贮存. 2. 准备无核酸和核酸酶污染的 Tip 头、离心管. 3. 第一次使用前,Buffer W2 concentrate 中加入指定体积的无水乙醇. 4. 第一次使用前,ET-free water (70%ethanol)中加入指定体积的无水乙醇.使用前置于-20 ℃预冷. 5. 使用前, 检查 Buffer S2 是否出现沉淀, 如出现沉淀, 应于

37 ℃温浴加热溶解并冷却至室温后使用. 6. Eluent A 在65 ℃预热后使用,能提高质粒得率. 7. Buffer ETR 使用前放到

4 ℃预冷. 8. 准备

42 ℃水浴.

四、操作步骤 实验前,请务必认真阅读本试剂盒操作步骤. 1. 取1-4 ml 在LB 培养基中培养过夜的菌液(若使用丰富培养基,菌液体积应减半或更少) ,12,000*g 离心

1 min,弃尽上清. 2. 加250 ?l Buffer S1 悬浮细菌沉淀,悬浮需均匀,不应留有小的菌块. * 确认 Buffer S1 中已加入 RNase A. 3. 加入

250 ?l Buffer S2,温和并充分地上下翻转 4-6 次混合均匀使菌体充分裂解,直至形成透亮的溶 液.此步骤不宜超过

5 min. * Buffer S2 使用后立即盖紧瓶盖,以免空气中的 CO2 中和 Buffer S2 中的 NaOH,降低裂解效率. * 避免剧烈摇晃,否则将导致基因组 DNA 污染. * 此步骤不宜超过