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文章编号 :

1000 -5404( 2003) 14-1275-03 论著 大肠杆菌不耐热肠毒素 B 亚单位融合表达载体的构建及应用 鲁东水,毛旭虎 ,吴超, 邹全明 ( 第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室, 重庆 400038) 提要: 目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素 B 亚单位的融合表达载体.

方法 PCR 扩增 LTB 基因, 并在其

3 ′ 端去掉 终止密码子, 引入编码 TAPI 接头, 通过 EcoRⅠ 和EcoRⅤ酶切位点重组于 Pinpoint Xa -Ⅰ 载体上, 将幽门螺杆菌尿素酶 B 亚 单位与之融合, 转化 E . coli JM109 , SDS-PAGE 及Western blotting 分析其表达. 结果 成功构建了 LTB 融合表达质粒, 并获 得了幽门螺杆菌尿素酶 B 亚单位与之融合表达. 结论 LTB 融合表达载体的成功构建为研究分子内佐剂疫苗奠定了实 验基础. 关键词: 不耐热肠毒素 B 亚单位;

融合表达;

载体 中图法分类号: R378.

2 + 1;

R394 -33 文献标识码: A Construction and application of a fusion expression vector containing subunit B of Escherichia coli heat-labile enterotoxin LU Dong-shui , MAO Xu-hu , WU Chao , ZOU Quan- ming ( Department of Clinical Microbiology and Immunology, Third Military Medical University, Chongqing

400038 , China ) Abstract: Objective To construct a fusion expression vector with subunit B of Escherichia coli heat-labile en- terotoxin . Methods Gene encoding LTB without stop codon obtained by PCR was introduced to a linker and was recombined on vector Pinpoint Xa-I through EcoR Ⅰ and EcoR Ⅴ sites and then fused with ureB . The recombinant was used to transform E . coli JM109 . The expression of LTB was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting . Re- sults The fusion expression plasmid was successfully constructed . The subunit B of urease of Helicobacter pylori ( Hp)fusogenic protein with LTB with the ability to bind GM1 and the reactogenicity with polyclonal antibodies against Hp was harvested . Conclusion The successfully constructed vector provides experimental base for the studies of in- tramolecular adjuvant vaccine. Key words: subunit B of heat labile enterotoxin ;

fusion expression ;

vector 大肠杆菌不耐热肠毒素( Heat-labile enterotoxin , LT) 是由 A 和B两种亚单位组成的, 其中A 亚单位具 有ADP-核糖基转移酶活性 , 能激活腺苷腺环化酶, B 亚单位具有与神经节苷脂 GM1 结合的能力 .LTB 亚 单位在胞浆合成前体 ,切下

21 个氨基酸残基的信号肽 后形成分子量约

11 .

8 *10

3 的成熟单体分子分泌到胞 周质与 A 亚单位按 A∶ B =1∶

5 比例组装成寡六聚体的 LT 全毒素分子 .LT 不仅是强烈的免疫原 , 也是一种 强有力的粘膜免疫佐剂.LT 与多种非相关的蛋白或 非蛋白抗原经不同的免疫途径共免疫均能明显增强机 体针对共服抗原的粘膜 IgA 和体疫 IgG 反应, 同时还 能消除机体对这些共免疫原的耐受, 诱发针对它们的 长期记忆反应 [ 1] .但LT 作为佐剂在应用时存在一个 基金项目: 国家自然科学基金资助项目(

30100161 ) 作者简介: 鲁东水(

1963 - ) , 男,江西省余干县人, 实验师,主要从事幽门螺杆 菌疫苗方面的研究.

电话: (

023 )

68752315 通信作者: 毛旭虎,

电话: ( 023) 68752315, E -mail : mxh95xy@mail . tmmu . com. cn 收稿日期:

2003 -05 -15;

修回日期:

2003 -06 -05 毒性问题.其B亚单位无毒性, 也具有良好的辅佐功 能.为了使 LTB 能与各种外源抗原基因融合表达分 子内佐剂疫苗, 我们构建了与 LTB 羧基末端融合表达 的载体 pLV2 .