PDF《变形链球菌表面蛋白编码基因载体质粒pMD-pac构建》

2:Xho I: 3:Sa/I;

4:Kpn I;

5:Nde I、Kpn I双酶切 图3 pMDl8一pae酶切电泳图 图4 pMDl8-pae质粒示意图 2.4测序以通用引物M13+和M13一双向测定, 正反向walkin98个反应,共计10个反应.将拼接组 装后序列用生物软件与报道的pac基因序列进行比 对,表明本实验所获得的目的基因与已报道的pae 基因核苷酸序列'

61同源性达99%. 3讨论 龋病是严重危害人类健康的口腔疾病,人群中 的发病率约40%,老年和青少年中的发病率高达 90%以上.为找到一个安全有效的防龋疫苗近年国 内外学者进行较深入的研究伸 0I.但对于表面蛋白 等抗原分子结构的基础研究上,还存在一些问题: (1)表面蛋白等抗原分子的二级结构和三级结构仍 不确定.相同性质的黏附决定簇在一级结构中可能 相距甚远,但在天然分子立体结构中,经反复折叠使 这些氨基酸聚在一起,构成一个或多个黏附功能 区∞'

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loJ.基因工程技术制备的用于黏附相关研究 的基因工程多肽的结构与全细胞表面蛋白天然全分 子立体结构间有一定差异,而且这些多肽的结构也 不甚清楚.不同变形链球菌菌株的表面蛋白编码基 因具有遗传多肽性【l川,其分子结构的功能多肽片 段可能有所不同,所提供的结合位点可能也有差异. (3)不同变形链球菌的黏结素不同,与之反应的唾 液成分(配体)不同,PAe主要与富脯蛋白、黏蛋白 和溶菌酶结合.本实验采用国内检出率最高的表面 链球菌分离株(血清c型)的表面蛋白编码基因作 为研究对象,设计特定引物直接从变形链球菌染色 体DNA中成功的扩增出约4.7 kbp的EI的基因,并 利用T―A克隆法将目的基因成功的连接到中间载 体上,经限制性内切酶单酶切、双酶切初步判断获得 了所要的目的基因.经测序和比对表明目的基因与 变形链球菌表面蛋白的相关编码基因在核苷酸和蛋 白同源性上都很高,可以作为抗原基因来构建防龋 疫苗.其所包含的功能黏附多肽片段及所提供的抗 原结合位点等方面可能与其他的报道基因 1有所 差异,在诱导的免疫应答反应上是否也有所区别,尚 需进一步研究. 【 参考文献】[1] Y,Cautleld PW,Emanuelsson IR,d a/.Differentiation of Streptococcus mM口gtn$and Streptococcus sobrinus via genotypic and phenotypie profiles from three different populations[J].Ora/ Microbiol lmmund,2001,16(1):16―23. [2]De Soet JJ,Villi l.overen C,Lammens AJ,d甜.Different cariogenicity between Fresh isolates of S.sobr/nus and s.Ⅲ伽w [J].‰Res,1991,25(2):116―122. [3] Kozai K,Nakayama R,Tedjosasongko U,et a/.Intrafamilial distribution of m咖m strq眦捌in Japanese families and possibility of father-to―child transmission[J].Microbiol lmmuaol, 1999,43(2):99―106. [4]黄晓晶,刘天佳,陈舟.变形链球菌(血清型C)临床分离株 AP・PCR基因分型[J].中华口腔医学杂志,2001,36(4):281 ........