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12 上海盖宁生物科技有限公司 Shangh Shangh Shangh Shanghai ai ai ai Gaining Gaining Gaining GainingBiological Biological Biological BiologicalTechnology Technology Technology Technology Co.

, Co., Co., Co., Ltd. Ltd. Ltd. Ltd. 细胞说明书

一、细胞简介

二、细胞收到后操作流程 1.收到细胞拿回实验室后,先打开外包装,用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,放到显微镜下 观察细胞状态.因运输问题,细胞会有不同程度影响,先不要打开培养瓶盖,放到培养箱静 置4小时左右,以便稳定细胞状态. 2.静置完成后, 取出细胞培养瓶, 镜检、 拍照, 记录细胞状态(所拍照片作为后期售后依据). 建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态. 3.贴壁细胞:若细胞生长密度超过 80%时,根据情况传代,若细胞未超过 80%汇合度时,可 将瓶装的完全培养液移入废液缸中,原瓶(T25 瓶)保留 6-8ml 完全培养液继续培养,直至 细胞密度超过 80%以后再进行传代. 4.悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体转移至离心管,1000RPM 离心

5 分钟,弃去上清液,管底 细胞沉淀加入 10ml 完全培养基吹打、重悬.放入新的细胞培养瓶/皿中培养过夜,根据细胞 密度及生长情况分瓶传代.

三、细胞常规培养步骤(请严格遵守无菌操作) 1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入 5mL 培养基 混合均匀.在1000RPM 条件下离心

5 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养基后吹匀.然后将 所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入 6cm 皿中,加入约 6ml 培养基, 培 养过夜),第二天换液并检查细胞密度. 2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养. 细胞名称 C6 大鼠神经胶质瘤细胞 生长特性 贴壁 形态特性 成纤维细胞样 培养条件 F12K+10%FBS+1%双抗 生长条件 气相:5% CO2 ;

95% 空气 温度:37 ℃ 传代方法 1:2 传代 ,2~3 天换液/传代 冻存条件 90%FBS+10%DMSO 支原体检测 阴性 备注 www.shgnsw.com

1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法: 1. 弃去培养瓶中上清液,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次. 2. 加1-2ml 消化液( 0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中, 置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台, 轻 敲几下培养瓶后加 6ml 完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落、吹散. 3. 吹打匀后吸出,在1000RPM 条件下离心

5 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀. 4. 将细胞悬液按 1:2 到1:4 的比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中.

2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM 条件下离心

5 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀, 将细胞悬液按 1:2 到1:5 的比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中. 方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按 1:2 到1:3 的比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中. 3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存.贴壁细胞冻存时,弃去培养基后 加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM 条件下离心

5 分钟,去除上清, 按冻存数量加入血清及 DMSO,冻存比例为 90%FBS+10%DMSO. 特别注意: 1. 1. 1. 1. 收到细胞后请尽快更换为含

10 10

10 10% % % % FBS FBS FBS FBS 的新鲜培养基,不建议使用原瓶中运输用培养基. 2. 2. 2. 2. 如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时拍照并联系实验室. 3. 3. 3. 3. 细胞任何售后问题,均需拍照存档并及时联系客服.