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0 BRL,M D ,USA ) . F 皿Detect∞nofBATBLV c e i l s b y n e s I e d PC R T h e a m ― p l / e on s we r e a n My z e d b y e I e c 【 r

0 D h o r 啷OTbySou t h e r n 叫o t h yb r i d i z i o n wi t h b t i t y l a t e x t~r o b e .

1 - Ne 旦ativeDon t r o l (U n f e e t e d FLK c e l l s

2 P0 s i t c o n t r o l ( BAT B LV c e l l ~) . DNA l a d d e r . (

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0 b p DNA l ad ― d c r .Gt b e o BRL,M D. USA ) t 临床血样 的检 测血样分别采自具 有临床症状和非临床症状的牛,随后 分别进行血清学诊断和Ne s t e d P CR 扩增 , 呢图5 . 结果证 明两种方法 的诊 断结果非常一致 ( 血 清学诊 断结果 将另行报道 ) . 图5 临床样 品的快 速检拦 栅F5Ra p i d d e t t n o f t he b o v i n e t e uk c a m i a Ⅵ r u s b y n e s t e d PCR i n b r o o d o t c a ] v ~ 讨论实验结果让明从BLV基因组 的envBp1区域 内选 择 的两 对 引物 是非常有效的,能从 两个BAT B L V 细 胞内检测 出BLV的前病毒 D NA. 由于每个 B AT B L V 细 胞含 有2 ―4 个BLV的前病 毒DNA , 因此 可推测这种Ne s t e d P C R方法至少能从 B AT― B LV 细胞或从被感染的淋巴细胞 内检 测出拷 贝数少 于8 的BLV前病 毒DNA. 在临床检验 中不需经过 逆转录作 用而直接从 被感染 的淋 巴细胞 中检测 出前病毒 D NA 的存在 , 结果和某些 常规血 清学方法检测 结果一致 . 同时 Ne s t e d P C R 方法能豁 补血清学方法的某 些缺陷,它不 仅为牛白血 病 的早 期诊断提 供 一个 可靠的诊断方法 , 也为 防止该病毒的传播及其分子流行病学研 究提 供了一个 有效手段 . 目前 , 囤外根多研究者都在利用 P C R和Ne s t e d P CR[

5 墩 术检测牛 白血病病毒和 它的前 病 毒形 式.各国研 究者 采用病毒 基 因组 内不 同 域的寡 聚核苷酸 作为 引物 , 例如用gag―p24,pol}upx等 区域内的 序 列作 引物,都取得好结果.笔者采用env―gp51区域 内的序列作为引物,维普资讯 http://www.cqvip.com 第4 期 王汉中: N e s t e d P C R在拴爵牛白血病病毒 的前病毒中的应用

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5 主要 考 虑下列 两 种因 素:1.env―gpsl~产物 是牛 白血病病 毒 的主要 表面抗 原,Ne~tedPCR的检 测结果 能和某 些血 清学方法相 比较 ;

2 . e n v ― g p S

1 ~ [ ]具有高 度保守序列 , 不 易产 生变异 , 这样就能有效防止 假 阳性 结果 出现 . - 参考文献aurnyA,C B r u c S ,Y CI c u t e r , a

1 .. B o V i n e l e u k e a mi a v i r u s a n d e n m a o ~ b o v i n e~u k o m .On d e r s t p o o r t J Ve t Re s

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4 2 S a g a t a N .T Y~ u n e ga-J Ts u z u ku - Ka wa m u r a一.Co m p l e t e nu de 删esegue a c e

0 f t h e g e n o m e

0 f b o v i ne l e u ke . a m i a v i r u s: l I s e v o l u t i o n m'

y r e L a t i o n s hi pt o o t h e rt e t r o v i r u s ~.Pr o c .Na t

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