PDF《HCV E2蛋 白诱 导 的体液 免疫 及CTL应答 研 究木》

第18卷 3期2003年 6月中国病毒学VⅡ 0LoGI CA SⅡ I GA

1 8 (

3 ) :

2 0 一2

1 2 J u n e

2 0 o

3 HC V E 2蛋 白诱导的体液免疫及 C T L应答研究木 郭泰林,叶林柏 ,郜金荣,吴正辉 ,余应龙,廖庆姣 ,杨 晓骏 ,陈晓曦,张源(武汉 大 学生 命科学学 院病 毒研究所,武汉,430072)Th e Hu mo r a l a n d Ce l l u l a r ( CTL)I mmu n o l o g i c a l P r o p e r t y o f HCV E2 P r o t e i n GUO Ta i - l i n, YE Li n - b a i 料,GAO J i n - r o n g , W U Z h e n g ― h u i , S HE Yi n g ― l o n g L I AO Q i n g - j i a o , Y ANG Xi a o - j u n , C HE N Xi a o ― x i , Z H ANG Yu a n ( I n s t i t u t e o f V i r o l o g y , Wu h a n U n i v e r s i t y , Wu h a n

4 3

0 0

7 2 , C h i n a ) Ab s t r a c t :T h e E

2 g e n e o f He p a t i t i s C Vi r u s wa s a mp l i f i e d b y P C R.

a n d c l o n e d i n t o t h e p Q E

3 0 a t t h e d o wn s t r e a m o f La c Z p r o m o t e r. Th e r e c o m b i n a n t v e c t o r DNA wa s i n t ro d u c e d i n t o t h e E. c o l i 盯109celltocreatethe J M1

0 9 p QE

2 . T h e HC V E

2 p r o t e i n f u s e d t o

6 Hi s p e p t i d e s wi t h mo l e c u l a r we i g h t o f

3 5 k Da wa s p r o d u c e d i n J M

1 0

9 p QE

2 c e l

1 . T o s t u d y t h e i mmu n o l o g i c a l p r o p e r t y o f E

2 p r o t e i n. t h e r a b b i t a n d BALB/ c mi c e we r e v a c c i na t e d wi t h E

2 p r o t e i n p u r i f i e d b y Ni . NTA. S u p e r f lo w. Th e a n t i b o d y a g a i n s t E2 wa s d e t e c t e d b y ELl S A, t h e r e s u l t s s h o we d t h a t t h e HCV E2 s p e c i f i c a n t i b o d i e s c o u l d b e o b s e r v e d a t t h e

1 4 t h d a y a f t e r i m mu n e . t h e n t h e l e v e l o f a n t i b o d i e s r o s e a n d r e a c h e d t h e h i g h e s t p e a k a t t he

55 m da y. t he n t he a n t i b od i e s h a d ma i n t a i ne d a t t h i s h i g h l e v e l wi t h t i t e r of

1 :

3 2

0 0 i n t h i s s t u dy. Th e s p e c i f ic CTLs we r e g ot t e n f r o m t he mi c e s pl e e ns ,a f t e r s i m u l a t e d a n d a u g m e n t i n vi t r o, t he y we r e u s e d a s t he e f f e c t c e l l s t o k i

1 1 t h e t a rg e t c e l l s ,wh i c h we r e c a l l e d P8

1 5 t ra n s f e c t e d wt i h pCE2. By LDH a s s a y , we c a n f i n d t ha t mo r e t h a n

3 0 % o f t h e t a rg e t c e l l s we r e k i l l e d a t t h e r a t i o n E: T =

2 0 o :

1 . a n d t h e r e a r e d i f l f e r e n t e f f e c t s i n d i f l f e r e n t i mmu n i t y i n j e c t i o n me a n s . T h e r e s u l t s s h o w t h a t t h e E

2 p r o t e i n C a n p r o v o k e a n t i b o dy i n i mm u ne r a b bi t s a n d s pe c i f ic CTLS i n t he mi c e .Fr om t hi s s t u d y.we s ug ge s t t h a t t he E2 pr o t e i n i s a go od c a n d i da t e f o r de v e l o pi n g a v a c c i n e t o p r e v e n t HCV i n f e c t i o n. Ke y Wo r d s : He p a t i t i s C Vi r u s ( HC V) ;

E

2 g e n e ;

C T L ;

Hu mo r a l i m m u n i t y 摘要 :应用 P C R方法扩 增出HCVE 2基 因编码

4 1

7 a . a - ~7

5 0 a . a的DNA片段 ,克隆 到原核表 达载体 p QE

3 0 L a c Z 启动 子下游,转 化JM109菌株.在 J M

1 0

9 菌株中诱 导表达出N端含6个组 氨酸的E2融合 蛋白,用 Ni ― NT A― S u p e r f l o w亲和 层析柱纯 化作 为抗 原免疫 实验兔和 B AL B / c鼠.定期取 免血 ,采用间接 E L I S A 方法检 测兔子体 内针对 E 2的抗体 水平和 维持规律 .结果显 示 ,距初 次免疫