PDF《张海的影响》

第40 卷第

4 期 西南民族大学学报・自然科学版 Jul

2014 Journal of Southwest University for Nationalities?Natural Science Edition 收稿日期: 2014-04-22 作者简介: 张海(1986-), 男, 汉族, 四川巴中人, 助理实验师, 硕士.

研究方向: 中药药效与毒理. E-mail:[email protected]. 通讯作者: 王平(1979-), 男, 汉族, 陕西咸阳人, 副教授, 硕士. 研究方向: 中药药效与药代. E-mail:[email protected]. 基金项目: 四川省教育厅项目"黄连治疗老年性痴呆(AD)作用与 α7nACh 受体相关性研究"(13ZB0314)和"民族药娘孜泽苦寒伤肝 量-时-毒复杂关系研究"(14ZB0467);

成都中医药大学科技发展基金面上项目"黄连碱体外抗炎及其潜在性治疗阿尔兹 海默症作用的研究"(ZRMS201337);

国家自然科学基金"从?痰-浊-毒?毒损脑络病机基础探讨对酒蒸黄连石菖蒲组分抗 糖尿病认知障碍的配伍调控机制"(81302912). doi: 10.3969/j.issn.1003-4271.2014.04.11 巴马汀对 LPS 诱导的 RAW264.7 巨噬细胞 IL-6 表达 的影响 张海

1 , 李佳川

2 , 胡泊杨

1 , 王平

1 (1.成都中医药大学, 四川 成都 611137;

2.西南民族大学, 四川 成都 610041) 摘要: 目的: 观察巴马汀对脂多糖(LPS)诱导的 RAW264.7 小鼠巨噬细白介素 6(IL-6)表达的作用. 方法: 采用 LPS 诱导RAW264.7 巨噬细胞建立细胞炎症反应模型, 加入不同浓度的巴马汀, 采用 ELISA 法检测 IL-6 的生成量;

采用 qRT-PCR 法检测 IL-6 mRNA 的表达. 结果: 巴马汀能明显抑制 LPS 诱导的 RAW264.7 巨噬细胞 IL-6 的生成, 以及 IL-6 mRNA 的表达, 并呈现出浓度依赖性. 结论: 巴马汀可通过抑制 LPS 诱导的 RAW264.7 巨噬细胞 IL-6 的生成及 IL-6 mRNA 的表达, 从而发挥抗炎作用. 关键词: 巴马汀;

LPS;

RAW264.7 巨噬细胞;

IL-6 中图分类号: R285, R96 文献标识码: A 文章编号: 1003-4271(2014)04-0527-04 内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁上的一种脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)和蛋白的复合物, 其中 LPS 是诱 发炎症反应过程中的主要致病因素, 它可以诱导体内单核-巨噬细胞合成并释放多种炎症介质, 参与机体免疫炎 症反应. IL-6 是释放的这些炎症介质中的核心成员之一, 具有广泛的生物学活性, 它不仅是一种炎症细胞因子, 也是一种促炎介质[1-2] , 检测 IL-6 对研究炎性疾病发病机制和治疗具有重要意义. 巴马汀(palmatine)系由毛茛科 植物黄连(Rhizoma Coptidis)的干燥根茎中提取得到的生物碱精制而成, 具有抗菌[3-5] 等广泛的药理作用. 动物试 验研究表明巴马汀具有促 ACTH 释放功能[6] , 故具有抗炎作用, 但就其抗炎机制而言, 目前研究甚少. 本研究通 过LPS 诱导的 RAW264.7 小鼠巨噬细胞建立炎症反应模型, 观察巴马汀对 IL-6 的生成及 IL-6 mRNA 的表达, 探 讨其体外抗炎机制.

1 材料 1.1 药品及试剂 巴马汀(HPLC≥98%), 成都曼思特生物科技有限公司;

胎牛血清, 北京元亨金马生物技术开发公司;

DMEM 培养基, 赛墨飞世尔生物化学制品(北京)有限公司;

二甲基亚砜(DMSO), 成都市科龙化工试剂厂. Alarm-Blue 细 胞增殖与活性检测试剂, 上海生博医学生物工程科技有限公司;

内毒素(LPS), 美国 Sigma 公司, BAY 11-7082, 碧云天生物技术研究所;

白介素 6(IL-6) 酶联免疫吸附法试剂盒, Uscn Life Science Inc;

qRT-PCR 试剂盒 SsoFastTM EvaGreen? SuperMix, Bio-Rad Laboratories. 1.2 细胞株 小鼠 RAW264.7 巨噬细胞株细胞, 购自中国科学院上海生命科学研究院. 第40 卷528 西南民族大学学报・自然科学版 1.3 仪器 SW-CJ-2FD 洁净工作台, 苏州安泰空气技术有限公司;