PDF《堕全查 严明 鲁晓道 邱定红》

f 第 9卷 第2期1994年 6月中国病毒学vm0LoG I cA SI N[ CA P / Vd .

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94 套式 P C R检测婴幼儿巨细 胞病毒感染. . 堕全查严明鲁晓道邱定红(南京铁道医学院生物教研室 , 南京

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0 9 ) 提要 本文采用套式 P C R ( N ~o a p o ! y m e r a ~c h a i n r e a c t i o n ) 技术对

6 l 倒要7/Z尹『7儿肝炎综台征( o n a t f j t i B ) 患者进行了H C M V ( H u m a n e y t o m e g ~ o v i r u B ) 检测 , 结果表明 , 当其用一对弓 『 物l 进行 P C R时,检出

3 3 倒患者为 H C M V阳性 , 阳性检出率为

5 4 .

1 I 而采用套式 P C R后・有47倒为 H C MV阳性 , 阳性检出率提高到

7 7 .

0 .可见套式 P e R方法的阳性检出率明显高于 一PCR.并远高于 目前使 用的其它方法. 同时也说明 H C M V是导致肝炎综台征的主要病原体之一 . 此外 . 灵敏性和特异性试 验表明.套式PeR技术的敏感度高、特异性强、简单快速,在临床检}|j和戳,.族中的一 个重 要成员 . 其基 因组 约为

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0 k b的双链 D NA, 是 一类 广泛传染的病 原体 . H C MV感 染可导致 新生儿巨细胞病毒包涵体病 ( Ne o n a t a l c y t o me g a l o v i r u s i n c h i s i o r l b o d y ) 、 先天 畸形、问质 性肺 炎(Pneumo c y s t i s p n e u mo n i a ) 、 早产、死胎等 多种疾 患.其先天性 感染 新生儿或婴儿感 染的临 床表现 尤为严重 , 如HCIvlV感染 所致的肝炎综合征等常留下智力低下 、 发育 迟缓 等永久性后遗症 , 严重 影响儿童的 身心健康 因此 , 对受感染 儿童进 行诊 断和防治具有 重要 的意义.传统的病毒分离 、 包涵 体检查或血清学 诊断等方法有的十分繁琐费 时,胄的 阳性 检 出率较 低.难以满足临床捡测的需要[

1 : . 近年来 发展起来 的RCR技 术为 H C MV的检测和 诊断提供 了一 个快速 、 敏感和特异性 强的方法 【

3 : . 本文 采甩套式 P C R技术对61例患有 肝 炎综 合征 的儿 童进 行 了检 测,以探 讨肝炎综 合征 患儿中HC MV的感染情 况及套式 p c R技术在 HC MV的临床检测中的潜 力. 材料 与方法 l 对象 被检测的肝炎综台征患儿主要由车市儿豪医硫病毒室提供 . 部分患儿由事院小儿科提供 . 共收集病 人BI例患儿出现明显黄疽 、 肝睥肿大或伴有其它瘟状 . 临床疑似 H C MV感染( 排除甲乙型肝炎)

2 巨细胞病毒 P C R引物 本文所用的 H C M V引物序列为 : 套外引物 C -

5 T G A G G A T A A G C G G G A GA T G ] L

3 和D-5~AC'

PGAGC/CAAGT T C T GC A GT -

3 I 套 内引橱 A― AG C TG C A T GA T GT GA G C A A G 一3 和B-5GA A GG C T GA G '

F I '

C q ~GG T A A -

3 , 均在 本室

3 9

1 型DNA台成 仪(ABI公司 )卜台成.可扩 增HCMV基 因纽 f I f 的即刻 早 期抗 原 基因 [ { i 的第个外 显于 的保守 序列 嗍.其套 外 引物扩 增的特 异性

1 D NA 片段 长度为242bp,套弓f物可扩增

1 4

6 t ~的DNA片段 . 车文于

1 9

9 3 年6月7日收到 . 9月 3日修回 ・ 磬加奉研兜的还前南 京市J L 童医院病毒室施 云、 王思智 、 '

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6 中国病毒学第9卷 '

标本处理 抽取 病 人血

0 .

5 ml , 放入加有 肝索或ACt)抗 凝剂 的 洁净 离 心管 - I . 取100ul全血 , 加等体{ } 【

5 t o o l , L的Nal溶液.振荡20秒 . 再加 等体积 的氯仿 / 异戊醇 (

2 4 】 ) . 振荡20秒