PDF《中国病毒学》

8 A, 棱 蛋白( N P )MA b A

2 S -

1 , A

3 5 , L

1 3

3 , A1

9 , A

2 0 , R3

1 ( 中国预防医学科学碗病 毒学研究所) ,

1 A S , b '

H

5 ,

7 D

1 和 抗血凝 素( H A) MA b

3 D

8 ,

3 G

1 , 即8 ,

8 G

2 ,

8 G3 ( 第 四军医大学分子病毒研究室 ) . 组织切片脱蜡入水, 去除组织 中内潺性过氧 化 错甍 活性 后.将每种MAb作1;

2 0

0 0稀 释后 , 分 别加 至组 织切片上 - { ℃孵育

7 2小 时后 避行 多重PA P染色,具体步孽按文献进行 .同时设有阳性 阴性和替代对照.

2 .

2 原位分子杂交 质粒 M5

5 及PGS分别含有 H a n t s a n病毒 R NA M 和 s垒 片段 e D N A, 系美国军事 医学 传染病 研 究所 S c h ma I j o h n c s构建,经棱 酸 内切 酶P皇tI消化,低融 点 琼脂 糖 电棘 分离 纯化 回收 特 异性 片段 , 变 性后 , 用异羟 基洋 地黄毒昔 配基-

1 1 一dUTP( D i g o ~g e n i n ― l l - d UTP ) 随机 』 物延仲珐 标记 作为探针 .非放 射性DI~A.标记及检 澍 试荆 盒 为西 德BoehvingerMi m~ e i m 公司产品.每次约标 记 g的 e D NA. 临 甩前经 变性, 用预杂交藏稀释至 l m

1 . 组织的预处理、 杂交过程分别按试剂盒操作指南进行. 杂交后 , 用碱性磷酸酶标记 由抗Dl g抗体检测,NBT/ B C I P 显色.棱固红染棱,脱水.透明,封片.试验同时 设有阳性对照,Di s标记pBR3 ,

7 .

8 D NA 杂交的替代 对照 爰 无瓣 P 的空白对 照和 RN聃e消化组 织 的阴性 对照 .

2 .

3 电铙厦免疫 电铙 选取经抗原染色 I B阳性 的组织 . 制作

2 m 的振动切 片, 按上述免疫组化方法进行 包埋前染色 ,

1 锇酸后 固定 . E p o n

8 1

2 包埋或不经染色直接包埋 , 超薄切片, 铅铀染色后电镜观察. 结果l抗原染 色结果 m 为圆形、 卵圆形或不 规则形 , 大小2―9 m, 呈单个或 多个存 在于 细胞浆 内的病 毒抗 原 阳性的实性 小体 , 与周 围胞浆及 弥漫性染色的抗原界限清楚 . 在3g例病例中的

2 O 椤I病倒组 织 中检 涸到病毒 m , 其 中包 括西安地 区的 6倒休 克期 和1例多尿期病 例,上海地 区的 3倒休 克 期和 9倒步尿期病例 以及江 西地区的 i倒步尿期 病例 , m 分布于尸检 组织 ( m 阳性 组织的 倒敦/m阳性 病例 中检涸 的组织例敦 ) 中的肝脏 (

1 /

1 6 ) ( 图la),支气管 、 肺(13/18)(图2),肾脏 (

1 2 /

1 9 ) ( 圈3),胃(

1 1 /

1 i ) . 肠(12/14),扁桃体 (

1 , 】 ) , 唾液 腺(214),腺垂 体(5/7)(图d),骨髓 和血藏单核 细胞(5/5)(图5),胰腺(1~/18)(图8a),前列腺(2/2)和睾 丸(4/6),除Al 9外的NP MAb s和除

3 G1外的 HA MAb s均 可显 示组织 中的 m 结构 , 而G2 MAb LV

4 8 A 则不能 . I B分布 在呼吸道上 皮,肾远 曲小管和集合管 E皮,胃肠道牯膜上 皮和腺上 皮.扁桃体 鳞状 上皮,胰腺腺 上皮和前 列腺腺 上皮等上皮细胞 胞浆内 , 约有

9 5 以上的细 胞阳性 ;

在肝细胞 , 肺'

I、 I型上皮 , 腺垂 体细胞 , 睾 丸生精上 皮育

3 0 %左右的细胞 阳性 . 另外 , m 也出现于个别病例 组织血液 白细胞及脾脏和 骨髓 的单校 巨噬细胞胞 浆中. 阳性对照 , 病 毒感染 的Ve r o E

6 细胞胞 浆也出现 NP及HA 阳性的 I B, 而G2阳性的 I B较 细小 ( 小于 m) ;

鼠脑 中IB以多个 出现于 神经细 胞胞浆 中,大小一致 , 仅 为病 毒HA 及NP抗原阳性 ( 图8a).2原位 分子 杂交结果IB阳性组织 细胞同时也检测 到病 毒RNA, 但 多数 为胞浆 内弥漫 阳性 , 仅 在肝 脏(1/1)(图lb),扁桃体 (