PDF《杨水云” 易全成》

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9 9 8年 8月 第28卷第 4期西北大学 学报 ( 自然科 学版 ) J o u m a t o f No r t h we s t Un i v e r s i t y( Na t u r a ] S c i e n c e Ed i t i o n ) A g .

1

998 Vo - .

2 8 No .

4 沙彦 一弓

6 f 酸碱度对温和 噬菌体 存活 与 吸附效 率 的影 响0杨水云 易全成赵文明 Q7罗(1j西安交通 大学化工学院生物工程 研究所 ,

7 1

0 0

4 9 , 西安 ;

2 ) 深圳 市高新技术产业 投资服务有 限公 司,

5 1

8 0

0 0 , 广东深圳 ;

第一 作者

3 5岁, 女,博士 生) 摘要实验 澳l定了pH对Bacillusthurlngiensisvar.entomo c i d u s温和 噬茵体T存活与 吸附鼓率的影 响作用结果表 明:在不同 p H 的介 质中,TP.存活的 能力相差很 大;

酸性介 质及 高碱 性介质对 T P . 都有不同程 度 的瞬 间灭 活作用 ;

T P . 存 活的 最适 p H 为7.7,且适宜其 存活的pH范围很 窄;

pH不同. T P . 吸 附到 苏云 金 芽袍 杆 菌表 面上 的效 率也 不同,在pH≥ 9范围内, p H 升高,吸附鼓率 降低 . 关 键词 ;

墨兰;

薹至垒茎 垫盘 垦塾叠;

兰堕 兰一 分 类号 Q9

3 9 .

4 8 非溶源的细菌被温和噬菌体侵染后会有两种发育途径 , 即裂懈和溶源化. 寄主细胞究竟遭遇何种命 运,取决于许多细胞 内外 因素 .如寄主与噬菌体 的基 因型口 ] 、 寄 主细胞 的生理 状态_

2 ] 、 感 染复数 的大 小]、环境理化 因素 等 .在生产实践中, 有许多生产菌本身就是溶源性菌株 , 由于种种理化 因素的诱 导,生产 菌株常常发生 自身裂解现象, 给生产带来损失. 酸碱度(pH) 是一个容易 控制的理化 因子 , 搞 清楚 环境pH与温和噬菌 体存 活及 吸附 效率 之间的关 系,可通 过控制发 酵液 酸碱 度 而预 防或 治理 溶 源性 生产菌 株的自身 裂解 问题 .

1 材料和方法1.1菌株与噬菌 体-实验用 测试 菌为Bacillust h u r i n g i e n s i s v a t . e n t o mo c i du s , 血 清型 为H6 , 来源于中国农 业科学院,本实验号 .温和噬菌体从 B. t h u r b z g i e n s i s r . t i a n me r a ~ i s的自发释放液 中分离得 到 ] , 本实验记为 T . 该寄主菌血清型 H. , 来源于湖北天门微生物研究所 . 经鉴定 ] , TP . 能使 溶源化而形成 B ( TP ;

) 溶源性 菌株.1.2培养 基 组成 用来配制噬菌体和细胞悬液 的稀释液 ( 下称 D 液, D 取自dilution一词) 由l牛肉膏 、

0 .

5 蛋 白胨 、

0 .

5 Na c J 组成;

pH分别 调至5,6,7,……,11等 . 用 于细 菌 培养 的液 体和固体 斜 面培 养基 由1牛肉膏、 l 蛋 白胨 、

0 .

1 葡萄 糖、0.5Na C

1 组成 , p H7 .

0 凝 固剂 为2琼脂测定 噬 菌斑 的双层 平板 , 底层为pH7 , 0的 D液 加2琼脂,上层由液 体 培养基 加0,7琼脂 构成 .

1 .

3 噬 菌体 悬 液制 备 为了避免寄主内限制性 内切酶对噬菌体 D NA的降解作用 , 试验用 B ( T P ) 释放的噬菌体为测试用 噬菌体 ( 其DNA 已被修饰 , 不会降解 ) , 以 作为测试用菌株 . 用接种针穿刺噬菌斑并移于 p H7 . 7的D 液中( 每毫升 D液中穿刺两针 , 使滴度达

1 0 p f u / mI ,

4 0

0 0 r / r ai n离心

3 0 mi n, 取上清液加人氯仿 ( 氧'

收稿 日期 :

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1 7 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 4期 杨水云等 : 酸碱度对 温和 噬菌体存活 与吸附效率 的影 响仿的体积分数为

2 ) 摇匀 , 静置后所得上清掖即为拟配噬菌体悬液