PDF《吴东,王 华林 ,邓菲,陈新文,彭辉 银 ,胡 志 红料》

第17卷 4期2002年

1 1月中国病毒学VI R0L0GI C A S I NI C A

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3 5 Nov e mb e r

20 02 棉铃虫单核衣壳核多 角体病毒 几丁质酶基因 的克隆与表达 吴东, 王 华林 , 邓菲, 陈新文, 彭辉银, 胡 志红料 ( 中国科学院武汉病毒 研究所无脊椎动物病毒学联合实验室, 湖北武汉

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7 1 ) M o l e c u l a r Cl o ni n g a nd Exp r e s s i o n o f t h e Ch i t i na s e Ge ne f r o m H e l i c o v e r pa a r mi g e r a s i n gl e - n uc l e o c a p s i d n uc l e o p o l y h e dr o v i r u s i n E .

c o l i W U Don g, W ANG Hu a ― l i n, DENG Fe i , CHEN Xi n ― we n, PENG Hu i ― y i n. HU Zhi ― h o ng ( i n t ― l a b o f I n v e r t e b r a t e Vi r o l o g y, Wu h a n I n s t i t u t e o f Vi r o l o g y,Ch i n e s e Ac a d e my o f S c i e n c e s ,Wu h a n

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7 1 . Ch i n a) Abs t r a c t :Th e PCR p r o du c t o f t he Ha SNPV c h i t i n a s e g e n e ,whi c h wa s wi t ho u t t h e N― t e r m i n a l s i gn a l p e p t i d e a nd t h e C- t e r mi na l e nd o p l a s mi c r e t i c u l u m l o c a t i o n s i g na l ,wa s c l o ne d i nt o a p r o k a r y o t i c e xp r e s ― s i on v e c t or p Pr o EXHTb.Af t e r t he i n du c t i o n o f I PTG,t he c hi t i na s e g e n e wa s s u c c e s s f u l l y e xp r e s s e d i n Es c he c hi a c o l i DH5 a. The e x pr e s s i on p r od u c t s ho wn a mo l e c u l a r we i ght o f

6 0 kDa , a n d i t c o v e r e d a b ou t

4 0% of t h e t o t a l p r o t e i n i n E .c o l i.W e s t e r n b l o t a na l y s i s u s i n g a n a nt i b o dy d e r i v e d f r o m Ac M ― NPV e h i t i na s e c o nf i r m e d t h e e x pr e s s i o n p r o du c t wa s a h omol o g u e o f ba c u l o vi r a l c h i t i na s e. Ke y wo r d s: He l i c o v e r p a a r m i ge r a s i n gl e ― nu c l e o c a ps i d n uc l e o p o l y h e dr o v i r u s;

Chi t i n a s e ;

Cl on i n g;

Exp r e s s i o n 摘要 : 根据 棉铃虫单核衣壳核多角体病 毒( Ha S N P V) 几 丁质酶 基 因的序列 , 设计 引物 , 引入适 当 的酶切 位点. 利用PCR扩增出不含 N末端信 号肽 以及 C末端 内质网定位肽的几 丁质酶基因 片段 .将该 基因 片断克 隆至原核表 达载 体pProEXHT b , 经IPTG诱导, 在大肠杆菌 DH

5 a中获得 了高效表达 , 表达 产物的 大小为

6 0 k D, 含 量占 菌体总 蛋白量的4O%.利用来源于 Ac MNP V 几丁质 酶的抗体对表达蛋 白进 行检测, 获得特 异性 的显色 信号 , 证 实所获原核表 达产物 与杆状病毒的几丁质酶具 有同源性 . 关键词 :棉铃虫单 核衣壳核 多角体病毒 ;

几丁质 酶;

克隆 ;

表达 中图分类号 : $

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3 文章 标识码 : A 文章编号 :1

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0 5 几 丁质酶 是一类具有生物催化活性的水解酶,它能特异性地水解几丁质.几丁质酶可分为 内切几 丁质 酶 和外 切几 丁质 酶.内切几 丁质 酶 可从 内部 随 机打 断几 丁质 , 产 生可 溶的、小分 子量的几丁四糖、几丁三糖和几丁二糖等产物.外切几丁质酶从几丁 质的非还原末端降解几丁质, 产物 为 N一乙酰葡萄 糖胺 . 在真 菌 的细 胞壁 和昆 虫的内外表 皮、呼吸道 、 肠 腔等组织中, 几丁质是 其主要成分….几丁质是昆 虫 杀虫 剂作 用 的一个 极具吸引 力 的潜 在靶 目标 .通过将几丁质酶导入昆虫体内来破坏其正常的组织结 构, 协助细菌或病毒侵入 目标害虫体 内, 可以达到抑 杀害虫 的目的.例如 以几丁质酶作辅剂与 B t 菌剂 一起施用可提高Bt菌 剂对枞杉卷叶蛾(Choris―toneuraiferana) 的 杀虫 效果[