PDF《吴东,王 华林 ,邓菲,陈新文,彭辉 银 ,胡 志 红料》

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6 】 .S h a p i r o等 人发现几丁质酶能显著增 强杆状病 毒LdMNP V对 舞毒蛾 的致 死作 用】.G o p a l a k r i s n a n等 将烟 草天 蛾 的几 丁质酶 基 因插 入Ac MNP V 的基因组 中. 重 收稿 日期 :

2 0

0 2 ―

0 3 ―

0 1 , 修 回日期 :

2 0

0 2 ―

0 4 .

0 1 基金项 目: 国家 自然科学基金(

3 9

9 8

0 0

0 1 ,

3 0

0 7

0 0

3 4 ) ;

国家杰 出青年基金(

3 0

0 2

5 0

3 ) ;

中国科学院创新工 程重 要方向性呗 L . s c ) 【

2 ―

1 .

0 2 , Ks c ) 【

2 一sw.

3 0

1 ―

0 9 ) ;

转基因植物专项( J

0 0 . A 一003);

中科院百人计 划、 青 年科学 家小组 资助项 目;

8 6 3项目(

1 0

1 ―

0 6 ―

1 0 ―

0 1 ;

2 0

0 1 A A

2 1

4 0

3 1 ) . 作者简介 : 吴东(

1 9

7 6 一),男, 陕西省西安市籍 , 博 士研究生, 研究方向为分子生物学. 料 通讯作者 : 胡志红(

1 9

6 6一) . 女, 湖北武汉籍, 研 究员, 研究方 向为分 子生物学与基因工程.C o r r e s p o n d e n c e a u t h o r . 维普资讯 http://www.cqvip.com

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2 中国病毒学第17卷组病毒对草地贪夜蛾( S p o d o p t e r a f r u g i p e r d a) 的半 致死时间 L T s

0 从88h下降到

6 5 h [ .重组大肠杆菌 表达 的 粘质 沙雷 氏 菌几 丁 质酶 在体 内、体外均能使夜蛾科幼虫的围食膜穿孔L

9 J . 在杆状病毒病毒的基因组中也存在着编码几丁 质酶 的基因.

1 9

9 5年Ha wt i n在Ac MNP V 中发 现 了第一个杆状病毒几丁质酶基 因, 研 究表明它是一 个晚期基因L l .A c MNP V 的几丁质酶同时具有 内 切和外切几丁质酶活性.Ac MNP V 的几丁质酶在 p H

4 . 0―9 . 0范围 内都能保持或接近 最大酶活, 且 在强 碱性 条件 下仍具活性,这不同于大 部分微生物几丁质酶 的活性范围( 最适 p H值为

4 . 0―5 .

0 ) L l . 研 究显 示,昆虫 病 毒几 丁 质酶 对受感染幼虫虫体的液化 是 必需 的Ll.在病 毒感 染的S. f r u g i p e r d a细胞内, A c MNP V 的几丁质酶表达后定位于内质网上L l .该酶 N端 的真核细胞信号肽可能通过与 内 质网的结合而有助于几丁质酶进入分 泌途径 , 而C末端的内质网定位结构 ( KD E I )则阻止几丁质酶 在病毒 感 染早 期的分泌,因此 只有 在感染的晚 期细胞裂解后. 几丁质酶 才会行 使其功 能使宿主液 化. 这一有趣 的分 泌过 程 可通 过 延迟 虫体 的液 化 而使 多 角体产量达到最高值, 从而对病毒的增殖有利【

1 2 ] . 我们前期 的研究表明, 棉铃虫单核衣壳核多角 体病毒的几丁质酶基因编码 区全长

1 7

1 3 b p , 推测编 码 一个

6 3 .

5 k b 的蛋 白质 ;

在起始密码 子ATG上游一24nt处有一个 典型的杆状病毒晚期 基因启动 子 元件 A T AA G,一1

7 n t 和一2

9 n t 处各有一个TATA b o x .在病毒感染细胞

1 8 h后检 测到几丁质酶基因 的mR NA, 因此确定 Ha S NP V几丁质酶基因为一个 晚期基因, 氨基酸序列 比较 分析发现在第

3 0

8 ―3

1 7 个 氨基 酸 残基 含有 几丁质酶第18家 族的催化活性 位点( Wa n g , d t a l ,待发表).本 研 究报 道Ha S NP V 几 丁质 酶基 因 在大 肠杆菌中的克 隆 与表 达,这将为该基 因的 深入研究和Ha S NP V 的遗传改良奠 定基础.1材料与方法

1 .

1 材料1.1.1菌株和质粒E. c o l i DH5 c c 菌株、 质粒 p uc1 9及pTZ19R由本室保存;