PDF《ClonePix™ 2》

2500 克隆/周1周克隆

300 克隆 96孔板

4 最优克隆 最优克隆 反应器筛选 有限稀释

300 克隆/周3周克隆

300 克隆 96孔板

30 最优克隆 摇瓶

4 最优克隆

30 最优克隆 摇瓶 在工艺进一步优化前即获得高产克隆(NS / O: 4-5 g / L,CHO: 5-6 g / L) ClonePix Clone Titer (g/L) qP (pcd) Clone

1 4.5 54.6 Clone

2 4.4 44.6 Clone

3 4.3 49.4 Clone

4 4.0 43.8 Limiting dilution Clone Titer (g/L) qP (pcd) Clone A 2.9 32.7 Clone B 2.8 21.0 Clone C 2.7 20.9 Clone D 2.6 29.0 比较ClonePix和有限稀释筛选到的最优NSO克隆.ClonePix筛选到克隆的qP和titer值增加了约2倍,细胞都来自于相同的亲代细胞. ClonePix系统相比传统方法,可以在短时间内筛选更多的克 隆,能够大大增加找到稀少的高产克隆的概率.通过下面的实 例(courtesy of MedImmune LLC),比较了传统的有限稀释和 ClonePix系统的有效性. ClonePix?

2 细胞系稳定性 经过两轮筛选之后稳定性细胞系数据

60 50

40 30

20 10

0 0

50 000

100 000

150 000

200 000 Relative Pr o duction/Confluence Fluorescence

80 70

60 50

40 30

20 10

0 0

20 000

40 000

60 000

80 000 Relative Pr o duction/Confluence Fluorescence ClonePix2系统结构

10 表达量不稳定是细胞系筛选早期阶段的主要问题.ClonePix系统可以直观分析克隆的不稳定性. 把筛选到的克隆铺到半固体培养基,4-7天培养后,使用ClonePix进行成像分析,比较子代克隆和亲 代克隆的表达量,验证克隆稳定性.也可以培养7-14天后,重新对亚克隆进行筛选. 筛选2%最优的转染的CHO细胞用于产量分 析.使用CloneSelect Imager分析细胞汇 合度. 经过两轮筛选后产量和汇合度的比值.使用 CloneSelect Imager分析细胞汇合度. www.MolecularDevices.com HEPA100 空气过滤 8通道 挑头 荧光成像 遮光罩 卤素灯加 热干燥 消毒剂灭菌 水洗漕 乙醇针头 毛刷洗漕 微孔板自动 开盖系统 目标板 堆板架 源微孔板 堆板架 封闭环境 内部UV 条码 阅读器 系统参数 成像 ClonePix

2 软件 预装专用成像软件的高性能PC,微软Windows7系统 白光成像 ? 透射光:对低对比度细胞克隆成像,如单层贴壁细胞或悬浮小细胞克隆;

? 落射光:挑取克隆的时候对克隆成像 荧光成像 共有5对激发/发射光滤光片.根据实验要求,通过软件自动 控制(推荐:一次最多可以同时使用三组滤光片,进行 多荧光成像分析) 数据追踪 内部有条码阅读器可以追踪每次试验中源微孔板和终微孔板的克隆数据 相机 整合16位冷CCD成像 成像速度 6孔板:5分钟/2个波长滤光片(标准条件) 分辨率 标准:28um;

Maximum: 1.5 micron 仪器 污染控制 完全封闭工作环境,配备HEPA Class100过滤器,仪器内部UV灭菌 源微孔板类型 Petriwell 6孔板、Petri well单孔板、Greiner 6孔板、Nunc 6孔板、Nunc OmniTray 终微孔板类型 GenetixPetri 96孔板、Costar 96孔板、Greiner 96孔板、Nunc 96孔板、Falcon 96孔板 源微孔板载 10块 终微孔板载量 10块Picking head

8 x picking pins - each pin independently controlled 挑取头 Diameter of picking pins is application specific - F1: suspension cells, F2: adherent cells 挑取速度 >

200克隆/小时 针头加热灭菌 专有卤素灯干燥站,用于加热灭菌和干燥 挑针液流系统 精确液流泵和管路系统;

5L无菌水和5L废液瓶(可以灭菌重........