PDF《高精度定量毛细管电泳法同时测定复合维生素 B 片中》

3 min 后取上清液,过0?

22 μm 水相滤膜,得到复合维生素 B 片提取溶液.

5 种维生素均用乙腈?水(20 ∶80, v / v) 配制混 合储备溶液,其维生素 B1 、B2 、B6 、烟酰胺和泛酸钙 的质量浓度分别为 5?

04、1?

07、2?

71、16?

46 和5?

19 g / L. 混合储备溶液分别用乙腈?水(20 ∶80, v / v)稀释

1、

2、

5、

10、25 和50 倍,配制成混合维生素样品 溶液. 1.3 毛细管电泳实验 新毛细管按其使用说明用超纯水冲洗

30 min, 每次实验前用 pH 9?

0 硼砂?硼酸缓冲液冲洗毛细管 柱30 min,两次进样间隔使用冲洗程序清洗进样针 头和进样管路,实验当天完成样品分析后用流速为 0?

8 μL/ min 的乙腈?水(10 ∶90, v / v)冲洗毛细管柱 至少

1 h. 分离缓冲液为

40 mmol/ L pH 9?

0 硼砂?硼酸缓 冲液. 分离过程中注射泵以 1?

0 μL/ min 的流速持 ・

2 6

6 ・ 第6期胡雯雯,等:高精度定量毛细管电泳法同时测定复合维生素 B 片中 B1 、B2 、B6 、烟酰胺及泛酸钙 续通入分离缓冲液,该分离缓冲液分流后通过分离 毛细管. 进样电压为-10 kV. 进样量为

10 nL(定 量阀自动进样). 没有使用毛细管柱温控制系统. 检测波长在

10 min 内为

280 nm,用于检测维生素 B1 、B2 、B6 和烟酰胺,10 min 以后转换为

210 nm,用 于检测泛酸钙.

2 结果与讨论 2.1 毛细管电泳分离结果 使用选定的毛细管电泳条件,混合维生素样品 溶液和复合维生素 B 片提取溶液中各成分可在

15 min 内完全分离,结果见图 1. 图1(a)5 种维生素混合溶液和(b)复合维生素 B 片 提取溶液的电泳图 Fig.

1 Electrophoregrams of (a) the mixture of five vitamins and ( b ) multivitamin B tablet extract solution Peak Nos: 1. vitamin B1 (thiamin);

2. nicotinamide;

3. vita? min B2 ( riboflavin );

4. vitamin B6 ( pyridoxine );

5. pantothenate. 2.2 样品提取溶剂的选择 维生素 B1 、B6 、烟酰胺和泛酸钙的水溶性较好. 维生素 B2 微溶于水,尽管在碱性溶液中容易溶解, 但维生素 B1 和B6 在碱液中易被破坏. 可通过添加 乙腈[15] 提高维生素 B2 的溶解性,并可保证其他

4 种维生素均可溶解. 试验比较了不同比例乙腈的提 取效果,使用 10% (体积分数,下同)乙腈提取时,维 生素 B2 的测定结果偏低;

而使用高于 20% 的乙腈 提取时,含量测定结果基本不变. 考虑到纯乙腈可 能影响后面的毛细管电泳分离,故提取溶剂选择为 乙腈?水(20 ∶80, v / v). 样品预处理方法见 1?

2 节. 2.3 缓冲液浓度的影响 缓冲液浓度是影响分析物迁移行为的重要因 素. 随着硼砂缓冲液浓度的增加,5 种分析物的迁 移时间不断增大(见图 2a),其分离度(见图 2b) 和 峰形也越来越好,并在

40 mmol/ L 时获得了最好的 分离效果. 继续增大缓冲液浓度至

50 mmol/ L,电 流较大,较高的电流会产生大量的焦耳热,导致基线 不平、分离效率下降. 故最终确定硼砂缓冲液的浓 度为

40 mmol/ L. 图2缓冲液浓度对(a)迁移时间和(b)分离度的影响 Fig.

2 Effects of buffer concentrations on (a) migration time and (b) resolution The subscripted number after R is the peak number of the two adjacent peaks in Fig. 1. 2.4 缓冲液 pH 的影响 缓冲液 pH 是影响分离及电渗的关键因素. 考 察了缓冲液不同 pH 值对分离的影响,结果见图 3. 在pH 9?

0 时5种成分可在较短的迁移时间实现完 全分离. 当pH 继续增大,电流上升,焦耳热增大引 起区带展宽,导致最后两个........