PDF《玉米矮 花叶病》

1 Spe c i f i e l t

7 of AⅡt i _ e r IⅢ t o 肼D M V by 【 廿rctEL1 SA c廿 g

5 .. 健朋g 5. 建 纯玉 米 矮花 叶浦毒

0 . 日B0.18大表 黄矮 病毒 D .

1 5

0 .

1 6 M D M V 矗YDV―GPV 纯 士传小麦 花叶病毒

0 . 拈0.14甜菜坏死 黄脉 病毒

0 .

2 1

0 .

1 7 S BW M V BNY VV 纯小麦 援杂斑 花 叶病毒 o .

2 0

0 .

1 5 感 崭叶计液

0 . T

0 .

2 0 W S S H V I nf e cI ed I … f B 口 蝈草 花叶 病毒

0 .

1 5

0 .

1 3 健叶汁液

0 .

1 8

0 .

1 7 TM V H e 8I t hy l e f 日pd盯拈维普资讯 http://www.cqvip.com 中国翥毒学第7卷 健叶汁液 、小 麦梭 条斑 花叶病毒 、小麦土传花叶 病毒 、烟草 花叶 病毒 、大麦黄矮病毒及 甜 菜坏 死黄脉病毒 等均无 反应,表 明该抗 血清具玉米矮 花叶病毒 专一 性.

三、间接ELISA实 验1.最适 特异性 I g G浓度的选择 l为适 应 实际应 用需要 , 选用

1 O倍稀 释 的病 叶 抖液 稀释倍散 图4MD MV 汁液敏 感度 副定 (间接 E L I S A) Fj g

4 S c 口s i t i vi t r of EIt r . ct o f MDMV I nf e e t l ed T i s m u e([ ad ! r e ~ t E LI S A) 汁液为包被抗原,对不同浓度的抗MDMV I g G 进行测定,测 得IgG的最适浓度为

0 .

5 g g / m] . ,

2 . MDMV 抗原灵敏度的测定t采用不同浓度 的提纯抗原和不同稀释倍 数的病叶汁液 包被, 以0.5ag / ml 的MDMV I g G测定 , 结果可测 出 提纯抗原 的最 低含量为

0 .

0 1 ;

t g / ml , 测 出感病汁液的最高稀 释倍数为

3 2

0 0 ~

6 4

0 0 倍 (圈

4 ).

3 . 田问标样测定:用间接ELISA测定在本所周 围玉 米地 采 集的田间标样

5 5 份, 其中有玉米矮花 叶病 症状的48份,无 症状的 7份,测定 结果 与 田间症状 基本相符.有症状叶与无症状叶 的读数乎 均值 分 别为0 .

7 9 、0 .

1 9 , 阳性 与阴性对照 的读数值分g I 为0 .

7 G 、0 . I

4 . 讨论1.玉米 矮花叶病毒为线 条状 ,具很强 的凝 聚趋势,在提纯过程 中会 因凝聚而 造成 在低速离心时的丢失 . 我们采用在悬浮缓 冲液 中加入0.1巯基乙醇 ,

3 % Tr i t o l t X一100以阻止病毒 的凝聚 .另外,为 了获得 有较高侵染活性 的病毒 ,在提 纯时,我们用 四氯 化碳来代替氯仿进行澄清,以减少对病毒活性 的影响.提纯结果表明采用以上方法是有效的,不仅获取 的提 纯病毒量 与国外报道相近 ,而且提纯 病毒 具较 强的侵染性.

2 . 目前 国内 外 已报 道运用一 种新的离心法 ― ― 蔗糖硫酸铯不连续密度 法提纯病毒[1 ,该法克服 了常规蔗糖密度法成带取带难的问题, 又避免 了氯化铯或 硫酸铯平 衡 密度所需 的长 时间离心 .我们 将此法 用在差速离心后病毒 制剂的进一 步纯化 上,获得 了 较为满意 的结果,得到 了较 高纯度 的病毒 .

3 . 由于有较 高纯度 的病毒,故用于抗血 清制备 的提 纯病毒总量仅为1 .

5 mg , 即获 得 了高效价的 MDMV抗体 ,由该 血清提取 的纯 化IgG用于 间接 E L I S A最适浓度仅 为0.5/~g/ml ,血 清学反应 证明该 MD MV抗体具较高的特异性 .

4 . 我们获得 的MD MV 株系类型, 由于实 验 条件 的限制, 目前 尚无 法 确定 ,但有 报道说 北京地 区MD MV 为 B株系…, 所以我们 的MDMV可 能是 B株系, 尚有待进一 步研究.5.在梯度 离心后, 我们发 现在 离心管 上部有一条不十 分明 显的带 ,取带 进行 紫外 检测 其吸收 曲线 与病 毒带 吸收曲线是一 致的, 电泳结果迁 移率是相 同的,电镜下观察 仰m ¨¨ 维普资讯 http://www.cqvip.com 第1期........